药物血清内黄芪甲苷含量测定及其抑制HSCs活化增殖实验探究.docVIP

药物血清内黄芪甲苷含量测定及其抑制HSCs活化增殖实验探究 摘 要：目的：探讨黄芪经正常、肝纤维化机体代谢后血清内黄芪甲苷含量差别，及其对肝纤维化发生中HSCs活化增殖的影响。方法：40%CCl4, 皮下注射9周制备大鼠肝纤维化模型。正常、肝纤维化大鼠分别灌服黄芪，提取正常、肝纤维大鼠药物血清，HPLC检测药物血清内黄芪甲苷含量。CCK-8法检测黄芪甲苷对HSCs增殖影响，3-Pro掺入－胶原酶消化法检测黄芪甲苷对HSCs胶原分泌的影响。结果：正常、病理药物血清内均可检出黄芪甲苷。病理药物血清内黄芪甲苷含量高于正常药物血清(0.1140 vs0.0851,P0.05)。见表2。 目前我国乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)携带者超过1亿，占我国人口的十分之一。全球丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)携带者也近2亿人。部分乙型、丙型肝炎患者会发展至慢性肝病。加之其它病因导致的慢性肝病，如慢性酒精性肝病、中毒性肝病等，慢性肝病患者数量巨大。同时，在我国肝癌患者中，95%可找到乙肝证据。慢性肝炎、肝硬化、肝癌成为恶性发展链。减缓或阻止肝纤维化进程成为重要的抗肝硬化、肝癌治疗对策\[9\]。肝纤维化是肝脏内细胞外基质(extra cellular matrix, ECM)弥漫性过度沉积性疾病，但无假小叶的形成。HSCs增殖、胶原合成增加是肝纤维化形成的重要环节之一\[10 \]。HSCs活化增殖，与肝纤维化的关系极为密切\[11\]。抑制HSCs的活化增殖及胶原合成，对于肝纤维化防治具有重要意义。 中医药治疗肝纤维化近年来成为研究重点。精简组方、对单味药进行深入研究是中药研究方向。中医认为慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化属于血瘀气结、脾虚范畴\[12\]。黄芪是中药补益补气的重要用药。目前研究表明，黄芪在防止肝糖原减少、抑制肝细胞脂质过氧化、拮抗肝脏内毒素、保护肝脏线粒体损伤、防止肝纤维化等方面均发挥重要作用\[13\]。 本研究表明，黄芪甲苷可抑制HSCs增殖，可能为黄芪抗肝纤维化的有效作用成分之一。但黄芪甲苷对HSCs的 I型胶原分泌并无显著抑制作用，表明其抑制肝纤维化作用的主要途径可能是抑制、减少活化的HSCs数量，而HSCs一旦活化为功能亢进细胞，黄芪甲苷可能不能进一步抑制胶原的合成分泌。故而作者考虑，黄芪抗肝纤维化作用可能通过减少HSCs数量或促进肝脏中胶原降解实现，而非直接抑制胶原合成。其更明确的作用机制仍需针对肝纤维化发生中多种因素进行研究。 本研究结果提示，黄芪正常、病理药物血清内黄芪甲苷含量存在差异，表明不同机体状态（健康、肝纤维化）对于不同药物的代谢过程及产物影响不同，符合中医辨证施治原则。部分中药经正常、病理不同机体代谢后代谢产物可能有所不同。故在选择中药研究方法时，应当从药物预期应用的人群进行考虑，若是用于养生的预防保健性药物，其前期研究更应注重在正常机体内的作用效果及不良反应。若明确用于某种疾病治疗的药物，对其机制与疗效的研究宜选择在同种病理模型动物体内进行更为妥当。 参考文献 \[1\] 姚希贤，唐有为，姚冬梅，等.益肝煎剂对实验性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响 \[J\].世界华人消化杂志，2001, 9 (3): 263-267. \[2\] Li C, Ren H, Zhang X, et al. Influence of leaf-picking on effective constituents of the Astragalus mongholicus roots \[J\]. Zhong Yao Cai, 1997, 20(12):494-496. \[3\] 张声鹏，施旭光，桂蜀华.关于中药血清药理学中血清供体动物是否造模的思考 \[J\].中国中西医结合杂志, 2001, 21(5): 388-389. \[4\] Mazzocca A, Sciammetta SC, Carloni V, et al. Binding of hepatic C virus envelope protein E2 to CD81 up-regulates matrix metalloproteinase-2 in human hepatic stellate cells \[J\]. J Biol Chem, 2005, 280(12): 11329-11339. \[5\] Wu J, Zern MA. Hepatic stellate cells: a target for the treatmeat of liver fibrosis\[J\]. J Gastr