制备细菌类单细胞生物扫描电镜样品方法的改进 the improvement of bacteria sample preparation method for scanning electron microscope observation.pdfVIP

第32卷第3期 电 子 显微学报 V01．32，No．3 2013年6月 ofChineseElectron 2013—06 Journal MicroscopySociety 文章编号：1000-6281(2013)03-0276-04 制备细菌类单细胞生物扫描电镜样品方法的改进 梁静南，刘一苇+，谢家仪 (中国科学院微生物研究所大型仪器中心，北京100101) 摘 要：常规扫描电镜生物样品制备过程中要经过多次漂洗和脱水，细菌类样品亦或单细胞样品体积微小，制备 的每步环节都需要离心收集。多次离心容易导致样品丢失，尤其是高通量的样品制备时，丢失更为严重。本文实 验结果表明：在3次漂洗固定液之后用滤纸包收集样品，由于乙醇的渗透速度快，滤纸并不会对乙醇的脱水造成太 大的影响。使用改进后的方法，不但能保证观察所需的样品数量，而且也节省了操作时间。 关键词：样品制备；改进；扫描电镜 文献标识码：A 中图分类号：Q934；Q336 doi：10．3969／j．1000-6281．2013．03．016 用于扫描电镜观察的生物样品在制备过程中， 随后将样品放入最里一层，以减少样品流失的可能 需要经过多次漂洗和脱水。细菌类微生物或单细胞 性。一将离心浓缩后的菌液滴人小纸包，立即用钉 生物样品体积微小，在制备的许多环节中都需要离 书器将另一端钉牢一÷放在容器内，梯度乙醇脱水， 心收集’1“。。多次离心可能会导致样品的丢失，也 增加了操作的时间；尤其是在样品数量较少或高通 20min／次)，注意试剂要覆盖住滤纸包一临界点干 量的样品制备时，上述问题更为突出。在前期工作 燥_+离子溅射：撤掉钉书钉，展开滤纸包，①将滤纸 的基础上。1o，作者做了进一步的摸索和实验，结果 包内粉末状的样品均匀洒在样品台上，纸片轻轻刮 表明，在细菌样品固定并经3次漂洗后，用滤纸包 匀，用洗耳球从侧面轻吹多余的样品；②或将滤纸 裹，然后进行乙醇的脱水。并为低剂量样品在后期 包展开后，在纸包最内层贴近折叠处的位置，剪裁成 5mm×5 离子溅射时粘黏到样品台的环节提供一种可能的补 mm滤纸块，粘到样品台的双面胶上。喷 金后置入FEI 救方法，保证了样品观察效果。 Quanta200型扫描电镜下观察。 1 材料和方法 2 结果与讨论 收集大肠杆菌…。大肠杆菌为本研究所常规 2．1直接粘黏到样品台的细菌样品的观察 保存，于37℃培养在LB培养基中，摇床培养12h。 在镜下取样品分布比较均匀的位置(图2)放大 样品离心后，收集沉淀的细菌体积量25mL左右。 观察(图3)，可见，经上述改进方法处理后的样品， 细胞形貌完好。 按以下程序进行操作：加入2．5％新鲜戊二醛悬浮 但在局部地区，难免会出现一些样品被完全或 固定2h一重蒸水清洗3次(需每步离心弃上清，加 部分压进导电胶内的现象，这种情况下，需要在电镜 重蒸水后用吸管吹打菌块)一制作纸包：取直径为 下寻找样品疏密合适的区域进行观察，有时甚至必 15cm的定量滤纸依次均等对折两次成扇形，剪去 须重新