姬菇5号与署优1号原生质体电融合条件的研究.pdfVIP

湖南农业科学 2008，(1)：22～24 姬菇5号与署优1号原生质体电融合条件的研究 罗应兰，李元文，夏志兰 (湖南农业大学食用菌研究所，湖南长沙 410128) 摘 要：对影响姬菇5号与署优1号原生质体电融台的交流电场频率，交流电场强，商流脉冲场强，脉冲宽幅，脉冲次数，电融合液 甘露醇浓度和CaC1，浓度等条件进行了研究。结果表明：交流电场频率为 1 500KHz，交流电场强为300V／cm．直流脉冲场强为2．5 KV／cm的，脉冲宽幅为6o 时，脉冲次数为4—5次，电融合液甘露醇浓度10％，CaCI 浓度0 4 mlnol／[ 为姬菇5号与署优1号原生 质体电融合的最佳条件，融合率达2l％。 关键词：姬菇；原生质体；融合 中图分类号：$646 文献标识码：A 文章编号：1006—060X(2008)0I一0022—03 Research on the Electrofusion Conditions of Protoplasts Between‘Jigu 5’and‘Shuyoul’ LUO Ying—lan，LI Yuan—wen，XIA Zhi—lan (Edible Fungi Institute，Hunan Agricultural 65dversity，Changsha 4 1 0 1 28，PRC) Abstract：The eleetrofusion conditions of piotoplasts hetween“Jigu 5”arid“Shu)on1”were studied．It showed that the fusion frequency of protoplasts reached 2 1％ with the following parameters：ahernate current(AC)1 500 kHz，300 V／era．direct current (DC)2．5 KV／em，DC pulse width(PW)60 ps，number of DC pulse 4～5 ti,ires，mannito]10％ allll CaCI2 0．4 mmol／I in electrofusion solution． Key words：pleurotus cornucopiae；protoplasts；ele【，trofusion 姬菇(Pleurotus cornucopiae)是白黄侧耳属中一 皮侧耳 Pleurotu．s ostreallt )原生质体。2种固体培养 种低温型食用菌，出菇温度范围为l0～24℃，不能 基，固体斜面培养基 l(PDA培养基)：马铃薯200 g， 适应周年生产的需要，而署优 1号(Pleurotus ostrea— 葡萄糖20 g，琼脂 l8 g，水l 000 ml；固体斜面培养基 tus)是糙皮粗侧耳属中一种高温型食用菌，出菇温度 2(MYG培养基)：麦芽糖 10 g，葡萄糖4 g，酵母粉4 范围为 1O～41℃，两者同属不同种，不能进行孢子 g．琼脂 l8 g，水l 000 nll。2种液体培养基，液体培 杂交，故本试验采用原生质体电融合技术进行体细 养基l：固体斜面培养基l中去除琼脂；液体培养基 胞杂交，其遗传性状具有互补性，因而姬菇5号与署 2：固体斜面培养基 2中去除琼脂。2种再生培养 优1号两种菌株进行融合，其融合子中有获得广温 基，再生培养基 l：PDA中加入稳渗剂；再生培养基 型姬菇的可能。 2：MYG培养基加入稳渗剂。 1．2 方 法 1 材料与方法 电融合仪为“SHIMADXU SH—l”(