新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用.pdfVIP

±苎坚竺：!!!!：!：型苎I吾宦团 ：兰!： 新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用 庄金秋。梅建国，管字，苗立中，沈志强 (山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州 256600) 中图分类号：$823文献标识码：A文章编号：1004--4264(2011)06—0031—06 摘要：牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一。做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重 要环节。本研究通过应用PKl5、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体。选用国内同等 价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象，采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细 胞三次连续传代培养法、MrI-I比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较，检测新生牛血 清的促细胞生长活性。最终确定了MrI-I比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。 关键词：新生牛血清；细胞倍增时间；四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)；检测方法 细胞工程是现代生物技术的重要组成部分。细 造成生物、医学研究及生物制品生产的极大损失。 胞培养的发展，培养基的质量是关键．在培养基的 而且2000年版《标准》只适用于人用生物制品生产 众多组成成分中．动物血清对细胞的生长繁殖发挥 用牛血清。而对于兽用生物制品、科研用的多种血 着重要甚至是难以替代的作用。而在动物血清的应 清尚无统一的要求。所以，众多应用新生牛血清进 用中牛血清的使用又是最为广泛的。所以牛血清是 行生产的企业都通过各种筛选方法来选择适合本 医药生物技术产品中重要的原辅材料。做好牛血清 企业细胞培养的、质量稳定的血清。 的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。为此， 目前，血清质量鉴定方法有定性法(rye等，1975)、 2000年版《中国生物制品规程》中，首次将牛血清的 质量标准纳入《中国生物制品主要原辅材料质控标 D氨基葡 准》，规定了牛血清生产管理和质量控制中需要做到 定法(姜述德，1985)以及微量N一乙酰…13 的八项检查内容。这一措施不仅为牛血清的生产和 萄糖苷酶(NAG酶)释放法(邵树君，2001)等[51。本实 使用提供了科学客观的依据，也从源头上加强了生 验拟通过对细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率 物制品的质量管理。新生牛血清(简称NBCS)是指测定法、细胞三次连续传代培养法、MTF比色法以及 采自出生24h以内、未吃初乳的健康犊牛之血清。 微量终点稀释法等多种筛选方法进行比较。以便建 由于价格上新生牛血清比胎牛血清(FBS)要低得多。立一种能准确、快速鉴定出新生牛血清促进细胞生 并且也足以满足一些常规培养的要求【”，因此在动 长活性的检测方法。 物细胞培养中，新生牛血清的应用最为广泛。但由 1材料与方法 于血清是一种很复杂的混合物，往往会因受到小牛 1．1材料 产地、个体差异、出生后采血时间以及制备过程中 1．1．1 细胞株 某些因素的影响，导致各批次间质量的差异很大嘲。 PKl5细胞、BHK21细胞和ST细胞均为本研究 院保存。 收稿日期：2010—12—28 1．1．2血清 作者简介：庄金秋(1978一)，女，山东潍坊人。在职兽医硕士。助理研 对照胎牛血清(Bovogen)和5种新生牛血清(编 究员，主要从事细胞培养和动物用病毒疫苗研制。 通讯作者：沈志强。 号为WH、LZ