辛伐他汀对鼠平滑肌细胞脂质蓄积及CXCL16表达影响.pdf

辛伐他汀对鼠平滑肌细胞脂质蓄积及CXCL16 表达的影响 硕士研究生 曹春辉 导 师 全智华 教授 中 文 摘 要 目的 观察oxLDL 对鼠源平滑肌细胞脂质蓄积的影响。观察辛伐他汀对oxLDL 诱导的鼠源平滑肌细胞脂质蓄积与影响。观察辛伐他汀对oxLDL 诱导的泡沫细胞 CXCL16 表达的影响。 方法 采用体外培养的 SD 大鼠平滑肌细胞作为研究对象，换含 0.1%血清的培 养基培养后加处理因素。 Ⅰ.不同浓度的oxLDL(0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L)与鼠源平滑 肌细胞共同孵育24h 和用60mg/L oxLDL 与鼠源平滑肌细胞孵育不同时间即(0h、 6h、12h、24h、36h)，油红O 染色观察细胞内脂质蓄积情况，高效液相色谱分析 法检测细胞总胆固醇蓄积情况，Western blotting 检测平滑肌细胞CXCL16 蛋白 质的表达。 Ⅱ.用 60mg/L oxLDL 与不同浓度的辛伐他汀(0uM、1uM、10uM、100uM) 共同孵育 24h，空白组作为对照组和用 60mg/L oxLDL 与最佳浓度的辛伐他汀 100uM，同时孵育不同的时间即(0h、6h、12h、24h), 空白组作为对照组, 油红 O 染色观察细胞内脂质蓄积情况，高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情 况，Western blotting 检测平滑肌细胞CXCL16 蛋白质的表达。 结果 Ⅰ.oxLDL 诱导的鼠源平滑肌细胞脂质蓄积与oxLDL 呈剂量依赖性和时间 依赖性(P0.05) 。.油红O 染色显示：与空白对照组和低浓度组比较，较高浓度的 oxLDL 组(60mg/L、80mg/L)诱导平滑肌细胞较 oxLDL 低浓度(20mg/L、40mg/L) 组胞内脂滴明显增多，体积增大。oxLDL(60mg/L)较长时间(24h、36h) 诱导平滑 肌细胞比较短时间(0h、6h、12h) 胞内脂滴明显增多，体积增大。在 oxLDL 浓 度为 0、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L 时，HPLC 检测的 CE/TC 的比值分 别为(10.78±1.25)% 、(24.40±1.84)% 、(35.6±2.47)% 、(56.16±1.80)%(P0.01) (57.50±2.47)%, 在60mg/L 的oxLDL 作用的不同时间即(0h、6h、12h、24h、36h)， 5 HPLC 检测的 CE/TC 的比值分别为(10.78±1.25)% 、 (23.78±1.80)% 、 (36.95±2.39)%、(55.39±2.22)%、(58.89±4.05)%(P0.05) 。 Ⅱ.辛伐他汀能抑制鼠源平滑肌细胞对oxLDL 的摄取，油红O 染色可见 oxLDL+simvastatin 组细胞内脂滴较oxLDL 组明显减少，且脂滴颗粒体积变小。 在oxLDL(60mg/L)与simvastatin 浓度分别为(0uM、1uM、10uM、100uM)时，HPLC 检测的 CE/TC 的比值分别为(57.28±0.83)%、( 55.06±2.05)%、(46.20±1.44)%、 ( 17.86±0.97)%. 正常组的 CE/TC 的比值为(10.78±1.25)%(P0.05). 在 oxLDL(60mg/L)与 simvastatin(100uM)作用不同的时间组(0h、6h、12h、24h)， HPLC 检测的CE/TC 的比值分别为(57.28±0.83)%、(34.74±1.21)%、(25.96±1.31)%、 (17.86±0.97)%(P0.01). Ⅲ.在正常对照组和荷脂细胞(CE/TC50%)组中，CXCL16 蛋白表达无显著差 异性(P0.05)，而在泡沫细胞(CE/TC50%)组中，CXCL16 蛋白表达显著增加， CXCL16 的表达与细胞泡沫化有关(p0.05)。辛伐他汀能降低泡沫细胞中的 CXCL16 的表达，且呈剂量依赖性和时间