对年轻细胞诱导早衰前后凋亡敏感性的研究-北京大学医学部.PDF

第 27 卷第 4 期 济 　宁 　医 　学 　院 　学 　报 2004 年 12 月 Vol 127 ,No 14 JOURNAL OF J ININ G MEDICAL COLL EGE Dec ,2004 对年轻细胞诱导早衰前后凋亡敏感性的研究 1 1 1 2 2 韩晓琳 　张向阳 　吴福国 　张宗玉 　童坦君 (1 2 ) 济宁医学院生物化学教研室 　 北京大学医学部生化与分子生物学系 提 　要 　目的 　探讨年轻细胞被诱导衰老后对凋亡的敏感性与年轻细胞的差异 ,并分析可能存在的机 ( ) 制。方法 　以人胚肺二倍体成纤维细胞 2BS 为研究对象 , 以H O 诱导 2BS 细胞早衰后 ,再以 H O 分别诱 2 2 2 2 导早衰 2BS 细胞和年轻细胞凋亡 ,DNA ladder 分析和苔盼蓝排除法检测细胞死亡率。结果 　早衰细胞较年 轻细胞不易被 H O 诱导凋亡。该因素是多方面的 ,不限于caspase - 3 的作用。结论 　早衰细胞与衰老细胞 2 2 一样 ,对凋亡诱导因素的反应性降低。 ( ) 关键词 　早衰 ;细胞凋亡 ;成纤维细胞 2BS 　　衰老是生物个体一生中所发生的程序事件和随 机事件的共同结果。机体衰老时体内稳态逐渐丧 失 ,不能对外界应激作出反应 ,表现为组织器官功能 进行性衰退 ,易感染疾病。细胞凋亡又称程序性细 胞死亡 ,是指为维护体内稳态 , 由基因控制的细胞自 主的有序性死亡 ,它在正常组织的发育更新 ,成体组 织的稳态维持和疾病防治中都起着重要作用。本文 以 H O 诱导年轻细胞提前出现衰老形态 ,构成早 2 2 衰模型 ,观察年轻细胞对不同浓度 H O 的反应性 2 2 及年轻细胞在诱导衰老前后对 H O 的不同敏感性。 2 2 1 　材料与方法 ( ) 图 1 　不同浓度 H O 处理年轻 2BS 细胞后在不同 材料 :人胚肺二倍体成纤维细胞 2BS 由原卫 2 2 生部北京生物制品研究所建株 ,30 代以下为年轻细 时间点用苔盼蓝排除法检测细胞死亡率 胞 ,55 代以上为衰老细胞。Caspase - 3 兔多抗、Lu2 衰老相关 β- 半乳糖苷酶染色 : 年轻细胞和 minol Reagent 为 Santa Cruz 公司产品 ,辣根酶标记 H O 诱导早衰的细胞生长至 70 %～80 %融合状态 2 2 山羊抗兔二抗为Jackson 公司产品。 时 ,用 PBS 洗