毛竹笋中脱氧核糖核酸酶的提纯和特性-南京林业大学学报.PDF

第15在第1期 南京林业大学学报 Yo/.15 No.l 1991主1lL____J旦旦旦丛 OF NA 1!JING FORESTRY 卫1SJVERSITX 品!arch 1991 毛竹笋中脱氧核糖核酸酶的提纯和特性 陆究辉 (林学系) 摘要毛竹笋中的脱轧核糖核酸酶 (DNase) 经热处理、硫酸咎沉A 淀、 Sephadex G- 100 和 DEAE一纤维索拉层析被提纯 27.2 倍， SDS-聚丙烯耽膀凝 肢也注显示单一的带.这种酶的分子量为 5 .4 X lO4 ，最适 pH 为 5.0-5.2，最适 温度为 65t ，它对 DNA、 RNA 和 Sl-AMP 二种底物都有水解活力，其活力比 例为 1: 1: 0 . 1.在 pH4.8 条件下，为了保持竹笋 DNasc 活力需疏基化合物存 在;但是在 pH8.0 条件下，疏基化合物对这种酶活力具有明显的抑制效应.除 低浓度(1 x 10 -sM) 的 KH PO. 和 NaF 对酶活力分别抑制 45% 和 42%. 一价 2 金属离于 K+、 Na+和 NH + (1 0-2M) 对酶活力有一些剌激效应外，高浓度(1 4 x 10-3M) 的 KH P0 DNase 活力有 10%-20%的剌激作用;在二价金 对什笋 2 2 属离于中.除Ca忡和 Mg++具有撇弱剌激作用外，其它离子都有抑制效应.金属 3 婪合剂 EDTA (10- M) 对竹笋 DNase 活力有明显抑制暗示，这种酶合、有对活 力所需要的金属离子. 关键词 毛竹;竹笋j 脱氧核糖核酸酶 中固分类号 S718 .43 脱氧核糖核酸酶 (DNase) 是参加核酸代谢的重要酶类之一，它在体内能降解 DNA，但是它也可参加 DNA 的合成 m 在微生物和动物组织中已经证明 DNase 的活 力水平与 DNA 合成和生长速度之间具有正相关 C S. 8) 毛竹笋体生长和退败过程与 DNase 活力的变化也具有密切的关系 ω. 但是，关于木本植物中 DNasc 的提纯和特性 的研究未见报道.为此，本文对毛竹笋中 DNase 的提纯和特性进行了研究，为掌握竹笋 DNase 的特性以及调节酶的活力和控制竹笋的生理退败提供参考. 1 材料与方法 1.1 DNase 的提取 挖取的毛竹 (Phyllostachys pubescens) 笋 (50cm 左右)洗净，除去笋籍，切下幼嫩 部分 36饨，在匀浆器中用含有 5mM 疏基乙酶的 0.05M 醋酸纳一醋酸冲液 (pH4.8) 匀 浆.匀浆液通过三层纱布过滤.滤液在 4000r / min 下冷冻离心，除去沉淀物，上清液为 粗的 DNase 提取液 (503ml) • 收稿日期 1990-l7-1 7. 16 南京林业大学学报 第15卷第1 期 1.2 DNase 的提纯 1.2.1 热处理 把盛有粗的 DNase 提取液的烧瓶放在 95t 水浴中，直到瓶内温度达到 75t 为止.然后.把烧瓶转移到 75t 恒温水浴中，保持 5 分钟和不断搅拌.随后便把烧 瓶放在冰浴中，直到温度降到 10t 以下为止.溶液在 4000r/ mio 下冷冻离心 30 分钟， 除去变性的沉淀蛋白质，保留上清液. 1.2.2 硫酸接分离 热处理后的上清液中加人硫酸接达 50%饱和度，搅拌25 分钟，混合 液在 4000r / mio 下冷冻离心 30 分钟，除去沉淀物.在上清