牙鲆不同组织抗菌肽的提取及部分性质检测.PDF

第26卷第2期 水 产 科 学 v01．26N。．2 291Q2生2旦 旦墨旦曼墅垦量兰鱼!曼盟g曼 ．：一：：：：：：：：：：：：：：：：：兰堡垒』!!!坚： 牙鲆不同组织抗菌肽的提取及部分性质检测 王辉，安利国，杨桂文 (山东师范大学生命科学学院，山东济南250014) 摘要：以新鲜的牙鲆为试验材料，用100％丙酮和90％甲醇配制的提取液，从牙鲆的鳃、皮肤、肝、肾 组织中提取抗菌肽，并对牙鲆抗菌肽粗提物进行部分性质检测。抑菌试验证明，牙鲆各组织提取物对 大肠杆菌、鳗弧菌有较强的抑制作用，并且不同组织的抑制作用有所差别，而对金黄色葡萄球菌的抑制 效果不明显。提取物经过加热处理后，抑菌圈略有变小。相反，经过胰蛋白酶处理后，抑菌圈略有变 大。牙鲆的多种组织中含有对细菌有抑制作用的抗菌肽。 关键词：牙鲆；抗菌肽；抑菌活性 中图分类号：S965．399 文献标识码：A 文章编号：1003-1111(2007)02一0087—04 抗菌肽(An汕acteriaLl 的H]。所以对鱼类抗菌肽的研究可能会为鱼类病 peptide)是有基因编码的 具有抗菌活性的一类小分子多肽的总称，广泛存在 害防治开辟崭新途径，促进渔业发展。 于微生物、植物及动物中。这种内源性抗菌肽经诱 导合成，在机体遭遇病原微生物入侵后，发挥非特 较高的重要经济鱼类，近年来，牙鲆的海水养殖和 异性免疫作用。自1975年steiner…等首次从蚕蛹淡水驯化均发展迅速。但对牙鲆的免疫机制了解 甚少，直接制约了牙鲆养殖的免疫预防和病害防 中诱导分离得到第一种抗菌肽一天蚕素(cecropin) 后，许多抗菌肽相继被分离纯化。迄今为止，已发 治。笔者以新鲜牙鲆为材料，用丙酮和甲醇配制的 现的抗菌肽超过700种心J，但长期以来，研究主要提取液从牙鲆皮肤、鳃、肝脏和肾脏中提取到具有 集中在高等动物和一些低等昆虫方面，海洋抗菌肽 抗菌活性的因子，并对其进行了部分性质检测，证 是近10年才发展起来的，目前已经成为抗菌肽研 明在牙鲆的不同组织中含有对多种细菌有抑制作 究方面的热点领域。研究表明海洋抗菌肽具有许 用的抗菌肽，为进一步研究牙鲆的非特异性免疫奠 多独特的优点[3]：杀菌活力很高，致死浓度均在微 定了基础。 摩尔级；作用迅速，往往在几秒或几分钟便可将 1试验材料和方法 99％以上的细菌杀灭；对真核生物细胞无毒性；活 1．1试验动物 性稳定且热稳定性好；高盐环境下，许多海洋抗菌 新鲜牙鲆购自济南市海鲜批发市场，体长30～ 肽同样具有抑菌活性。动物抗菌肽还有一个突出 40 cm，体重500—750 g，健康无损伤。 优点，即不易使靶菌株产生抗性，这使研究和开发 1．2试验菌株 新型抗菌药物来代替抗生素成为可能。 大肠杆菌(豇ck嘞危玩co髓，E 鱼类是一种低等脊椎动物，其特异性免疫系统 还不够完善，非特异性免疫系统却较为发达，抗菌 —6，购自山东省防疫站；鳗弧菌(w捌。 肽是其非特异性免疫系统的重要组成部分。鱼类 肌g酩跏