第6讲植物细胞代谢驳您物制备I.pptVIP

第四篇 生物制品生产;;第9章内容安排：;;一 植物细胞培养的定义;二 植物细胞特点;植物细胞直径一般约为10-200μm，平均直径比微生物细胞大30-100倍。 植物细胞通常以一定细胞数的非均相细胞团方式存在于培养液中。 植物细胞具有纤维素细胞壁和大的液泡，很容易被剪切力损伤。 与微生物细胞相比，植物细胞生长速度慢，操作周期长，分批培养一般需要2-3周。 植物细胞培养基成分丰富而复杂，适合微生物生长，因此防止污染更困难。 植物细胞培养一般需要光照，通过光合作用合成有机物，因此氧气和CO2的含量与传递对细胞培养影响较大。 ;三 植物细胞培养历史;四 植物细胞培养技术;（二）植物单细胞分离;;（三）植物细胞初步培养;;（四）植物细胞大规模悬浮培养;悬浮培养的生物反应器;问题3：与传统微生物发酵罐相比，植物细胞培养的生物反应器有什么特点？ 由于植物细胞与微生物细胞形态结构不同，具有不同的生长特性，例如：较微生物细胞大，对氧的要求相对微生物要低，周期长，易团聚等。因此微生物反应器并不完全适合于植物细胞生长与生产，需要进行改造。 例如： 对剪切力耐受性差：搅拌桨改造 需要光照：外光源、内光源，透明材料。 易粘附：结构尽量简单。;机械搅拌式生物反应器（Stirred tank rioreactor）一般由罐体、搅拌桨、控温系统、气路、传感器等组成。依靠搅拌器使液体产生轴向流动和径向流动。该生物反应器的优点是搅拌充分，供氧能力和混合效果较好。 ;植物细胞培养时搅拌桨选择;;气升式生物反应器(Air-liftbioreactor)由气升室、气降室、除气室和底部四部分组成。 培养液循环的动力来自于气升室、气降室中因含气量不同而在底部产生的压力差，因而比鼓泡型有更均一的流动形式。 根据反应器内部结构与气体分布器的位置不同可分为内环流和外环流两种。 ;鼓泡式生物反应器(Bubblecolumn bioreactor) 又称为鼓泡塔式反应器，是最简单的气动式生物反应器。 气体分布器一般位于底部中央，气体从底部通过喷嘴或孔盘进入反应器。它不含转动部分，整个系统密闭，易于无菌操作。 不同于气升式生物反应器，液体在反应器内部呈无规律的湍流状态。培养过程中没有机械能消耗，适合于培养对剪切力敏感的细胞。然而对高密度及粘度较大的培养物，反应器的混合效率会降低。 ;其它类型生物反应器;（五）植物细胞固定化培养;与细胞悬浮培养相比，植物细胞固定化培养具有以下优点： 1.细胞经包埋后使所受的剪切力损伤减小，维持了细胞的稳定性，适合脆弱的植物细胞的培养，同时也利于采用传统生物反应器大规模培养。 2.悬浮细胞培养体系中细胞密度比较高时会因粘度增加引起传质困难。固定化细胞培养系统中细胞密度远高于悬浮培养，但并不会改变培养液流体性质，利于传质。 3.大多数植物次级代谢产物合成在生长停止后才大量合成。采用固定化培养可以将细胞生长与产物合成分成两个阶段。 ;;1.固定化方法;（3）包埋法;;海藻酸盐(Alginate) —多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)微囊化;;2.固定化细胞的活力测定;3.固定化细胞培养的生物反应器;填充床生物反应器(Pipe-conebio-filter reactor)细胞固定在支持物的内部或表面，细胞固定不动，流体按照一定方向从反应器中流过实现混合和传质。可以是垂直的，也可以是水平的。一种垂直的填充床生物反应器示意图如图。 优点是单位体积细胞的容量大。 缺点是混合效率低、易造成传???困难、固定床颗粒或支持物碎片会阻塞液体的流动。 ;;（六）植物细胞培养操作方式;1.分批式培养（Batch culture）;;;典型的分批培养过程;;2.流加式培养（Feeding culture）;流加培养的优点;3.半连续式培养（Semi-continuous culture）;4.连续式培养（Continuous culture）;5.灌流式培养（Perfusion culture）;本节小结