1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立.pdfVIP

河南农业科学,2017,46(2):116-119 JournalofHenanAgriculturalSciences doi:10.15933/ki.1004-3268.2017.02.024 1型鸭肝炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立 王永娟,朱善元,王安平,吴 双,洪伟鸣,左伟勇∗ (江苏农牧科技职业学院/ 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州225300) 摘要:为建立快速检测临床1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)感染的方法,根据 DHAV-1 的vp1 基因 序列设计1对引物,以DHAV-1及其他常见的感染鸭的病毒基因组为模板,建立了DHAV-1 的 特异性RT-PCR检测方法;以10倍梯度稀释的DHAV-1RNA 为模板,测定该方法的灵敏度;采 集江苏多地的疑似DHAV-1 感染病料,提取基因组进行 RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断 所建立方法的检测率。 结果显示,建立的方法可以特异性扩增DHAV-1vp1 基因保守区360bp 的 序列,最低可检测1fg基因组模板,对临床样品检测率为100%。 表明,成功建立了特异性强、灵敏 度高且可以用于临床快速诊断DHAV-1 感染的方法。 关键词:鸭;1型鸭肝炎病毒;反转录PCR;检测 中图分类号:S855.3 文献标志码:A 文章编号:1004-3268(2017)02-0116-04 EstablishmentofRT-PCRMethodforDetectionof DuckHepatitisVirusType1 WANGYongjuan,ZHUShanyuan,WANGAnping,WUShuang,HONGWeiming,ZUOWeiyong∗ (JiangsuAgrianimalHusbandryVocationalCollege/JiangsuProvincialKeyLaboratoryofVeterinary BiopharmaceuticalHighTechResearch,Taizhou225300,China) Abstract:Inordertoestablisharapiddetectionmethodfordicnicalduckhepatitisvirustype1(DHAV-1) infection,apairofprimersbasedon vp1 genesequencewasdesigned.UsingDHAV-1or othercommon diseasevirusgenomeastemplate,aspecificityRT-PCRmethodwasestablished.Thetemplatewasten timesdilutedforsensitivitydetection.SomesuspectedDHAV-1infectedepidemicmaterialswerecollected fromJiangsu province.Genome of the materials were extracted and detected followed with sequence determination.Theresultsshowedthattheestablishedmethodcouldspecificallyamplify vp1 conservative region360bpsequence.Thesensitivityandspecificityresultsshowedthatthedetectionlimitationwas 1fg,andtherewasnocrossreactionswithotherduchvirused.Thedetectionrateofclinicalsampleswas 100%.TheresultsshowedthatahighspecificityandhighsensitivityRT-PCRmethodforrapidclinical diagnosisofduckDHAV-1infectionwassuccessfullyestablished.