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Optiprep连续密度梯度离心方法的建立.pdf
834 生物技术通讯
LETIERS 1l~-iHOTECHNOLOGY Vo l.27 No.6 Nov. , 2016
doi: 1 0.3969/j .issn.l 009-0002.20 16.06.020
技术方法
Optiprep 连续密度梯度离心方法的建立
张辉1·2 ,毕研伟 l2 ,李智华 l2 ,李亚东 l2 ,官悦 l , 2 ,寸辑1.1
1.中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,云南昆明 650118; 2. 云南省重大传染病疫苗研发重点
实验室,云南昆明 650118
[摘要] 目的:试验不同条件,优化Optiprep 密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep 连续密度梯度,为纯化病毒提供
良好的参数。方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时问,以及用不同浓度的Optiprep 制备连续密度梯度等条
件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV) ,并通过 qRT-PCR 验证纯化效
果。结果:通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备 10%-40% Optiprep 连续密度梯度,在
旋转角度为 85。时, 1 号程序设置为 30 rlmin 离心 5 s , 2 号程序设置为o r/min 15 s ,重复 1-2 程序 10 次。将此程序用
于纯化HCV ,得到了较好的纯化效果。结论:建立了制备Optiprep 连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯
化效果提供了参数。
[关键词] Optipr叩密度梯度离心;映克沙醇:旋转角度;纯化
[中图分类号] Q503 [文献标识码] A [文章编号] 1009-0002(2016)06-0834-4
Establishment of Optiprep Continuous Density Gradient Centrifuga-
tion Method
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ZHANG Huil ,2, BI Y;αn-Wei . , L/ Zhi卜-Huαa L/Y;α- DOngiIJ气, GONG Yu旧e J, CUN We创旷i , 2
气 气
气气
1. Institute of Medical Biology , Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College , Kunming
650118; 2. Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development of Severe Infectious Disease , Kunming
650118; China
*Corresponding author, E-mail: cunwei@foxmai
[Abstract] Objective: Through testing different conditions to optimize the Optiprep density gradient centri
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