Optiprep连续密度梯度离心方法的建立.pdfVIP

834 生物技术通讯 LETIERS 1l~-iHOTECHNOLOGY Vo l.27 No.6 Nov. , 2016 doi: 1 0.3969/j .issn.l 009-0002.20 16.06.020 技术方法 Optiprep 连续密度梯度离心方法的建立 张辉1·2 ，毕研伟 l2 ，李智华 l2 ，李亚东 l2 ，官悦 l ， 2 ，寸辑1.1 1.中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所，云南昆明 650118; 2. 云南省重大传染病疫苗研发重点 实验室，云南昆明 650118 [摘要] 目的:试验不同条件，优化Optiprep 密度梯度离心方法，建立最佳的Optiprep 连续密度梯度，为纯化病毒提供 良好的参数。方法:试验不同的旋转角度、重复次数、离心时问，以及用不同浓度的Optiprep 制备连续密度梯度等条 件，摸索制备连续密度梯度的最佳方案，将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒(HCV) ，并通过 qRT-PCR 验证纯化效 果。结果:通过各种条件的摸索，确立了制备连续密度梯度的最佳方案，即制备 10%-40% Optiprep 连续密度梯度，在 旋转角度为 85。时， 1 号程序设置为 30 rlmin 离心 5 s ， 2 号程序设置为o r/min 15 s ，重复 1-2 程序 10 次。将此程序用 于纯化HCV ，得到了较好的纯化效果。结论:建立了制备Optiprep 连续密度梯度离心的方法，为进一步提高病毒的纯 化效果提供了参数。 [关键词] Optipr叩密度梯度离心;映克沙醇:旋转角度;纯化 [中图分类号] Q503 [文献标识码] A [文章编号] 1009-0002(2016)06-0834-4 Establishment of Optiprep Continuous Density Gradient Centrifuga- tion Method l 2 l l l ZHANG Huil ,2, BI Y;αn-Wei . ， L/ Zhi卜-Huαa L/Y;α- DOngiIJ气， GONG Yu旧e J， CUN We创旷i ， 2 气 气 气气 1. Institute of Medical Biology , Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College , Kunming 650118; 2. Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development of Severe Infectious Disease , Kunming 650118; China *Corresponding author, E-mail: cunwei@foxmai [Abstract] Objective: Through testing different conditions to optimize the Optiprep density gradient centri