O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

第 36 卷第 10 期 中国预防兽医学报 Vo l. 36 ,No. 1O 2014 年 10 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Oct. 2014 doi: 10.3969/j .issn. 1008-0589.2014. 10.10 0 型、 A 型及 Asia1 型 3 个型口蹄疫病毒 通用套式 RT-PCR 检测方法的建立 李金海 l ， 2 ，李兴玉 3 ，曹三杰 2 ，陈斌l ，文心田\张毅l (1.四川省动物疫病预防控制中心，四川成都 610041; 2. 四川农业大学动物医学学院/猪病研究中心，四川雅安 625014; 3 四川省畜牧科学研究院，四川成都 610066) 摘 要:为了建立针对流行于我国及周边国家主要口蹄疫病毒(FMDV)血清型的检测方法，本实验设计 2 对 特异性引物，通过对反应条件的优化，建立了能够同时扩增 0 型、 A 型及 Asia1 型 FMDV VP1 全基因的套式 RT-PCR (RT-nPCR)方法。该方法能特异性检测 0 型、 A 型和 Asia1 型 FMDV，对其它相关动物病毒的检测结果均 为阴性;比 FMDV 多重 RT-PCR 商品试剂盒敏感约 1 000 倍。利用该方法对 10 份 FMDV 样品进行扩增检测，结 合扩增产物的克隆测序技术，对所检样品进行了准确定型。实验结果表明，该方法通用型强，可用于 3 个血清型 FMDV 的检测和分子流行病学调查。 关键词:口蹄疫病毒; RT-nPCR; VP1 基因 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2014)10-0784-04 Development of a nest RT-PCR for simultaneously detecting serotype 0 , A and Asia1 FMDV 1 2 LI Jin-hail LI Xing-归3 ， CAO Sao才ie ， CHEN Binl , WEN Xin-tiao , ZHANG Yi 气 (1. Sichuan Center for Animal Disease Control and Prevention , Chengdu 610041 , China; 2. Swine Research Center , College ofVeterinary Medicine , Sichuan A伊cultural University , Yaan 625014 , China;3. Sichuan Animal Science Academy , Chengdu 610066 , China) Abstract: In order to estab1ish the assay for detecting the main serotypes of foot-and-mouth disease virus (FMDV) preva1ent in China and neighboring countries and region