大鼠液化石油气中毒后脑细胞形态学改变及GFAP表达的变化.docVIP

大鼠液化石油气中毒后脑细胞形态学改变及GFAP表达的变化 李 竞 ，葛朝莉 ，白润涛 ，韩漫夫 ， 陈 婷 ( 深圳市第二人民医院神经内科，深圳 518035) 摘 要 ： 目的 观察大鼠液化石油气中毒后脑细胞形态改变及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。方法 采用大鼠液化石油气中毒模型，动物分别于中毒后1、3、7、14、21、28 d处死，苏木精-伊红染色观察脑组织神经细胞的动态变化，免疫组化方法检测脑组织GFAP的表达水平。结果 大鼠液化石油气中毒后大脑皮层神经元细胞核浓缩，结构不清，随中毒浓度增加，细胞核浓缩更明显，但未见明显神经元坏死迹象。免疫组织化学技术观察显示GFAP表达增加，随中毒浓度升高，GFAP表达亦明显增加。结论 液化石油气中毒后大脑皮层神经元形态学改变是认知功能下降的病理基础之一，脑组织GFAP表达的增加是损伤修复的一种表现。 关键词： 液化石油气中毒 神经细胞 胶质纤维酸性蛋白（GFAP） 中图法分类号：R135.1＋.4 ; R361＋.2;R392.11 文献标识码：A 液业化石油气（LPG）主要由乙烷，丙烷，乙烯，丙烯，丁烯等烷烃类和少量H2S等所组成，常温常压下为气态，在压力和降温条件下才变成液态。LPG中毒方式分为两类，一是直接吸入该气体引起中毒，二是燃烧该气体不完全引起中毒。前者中毒主要危险因素是烷烃类，低分子量烷烃类的主要毒性作用是中枢神经系统的麻醉作用，并随浓度的增加而增加；实验证实：当空气中烷类体积分数为10%吸入2 min可引起头痛，25%～30%吸入2 min可出现头晕，抽搐，进一步窒息死亡。后者中毒的主要成分是CO。两种中毒方式比较前者中毒 的程度更重，脑病的发生率更高[1 ] 目前人们已经对CO中毒病理改变、发病机制有了深入的研究，但液化石油气中毒后神经系统损害的病理改变及机制未见研究报道。本实验通过模拟液化石油气中毒环境，制备急性液化石油气中毒动物模型，采用大体、光镜、免疫组化染色等方法，动态观察液化石油气中毒后不同时期脑内神经元变性坏死、胶质细胞增生及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达等的变化及其相关性，寻找其在急性液化气中毒的发生、发展过程中可能的作用机制，为液化气中毒的病理生理过程的研究提供理论依据，不但有助于理解液化石油气中毒的发病机制，且对于防治液化石油气中毒有重要意义。 1 材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物及选取健康雄性成年SD大鼠，体260～310 g（由广东省医学实验动物中心提供）分为对照组、20%浓度组和50%浓度组（每组30只）。 1.1.2中毒箱制备液化石油气中毒箱自行设计，用薄型不锈钢加工而成，其下部为一圆桶状结构，上部连接一圆锥形结构，其间用铁丝网分隔。圆桶部分亦用铁丝网平均分成3份，每份即为一个大鼠中毒室，每个中毒室外壁下方开一个直径为10cm的带螺纹的圆形开口，以便放入和取出大鼠。每个圆形开口配有带气垫圈的有机玻璃盖，用于密封并可以观察大鼠的中毒情况，其中一个盖有小孔，其间可伸进塑胶管（实验时外端夹闭），以便抽取气体样本进行检测。圆锥体顶端接有管道及阀门，用于加入液化石油气。中毒箱容积为50 L0%水合氯醛ml/kg腹腔麻醉ˉ±s） A：正常对照组（HE染色×400）；B：20%浓度组可见大脑皮质，海马区，神经元细胞核浓缩；C：50%浓度组大脑皮质神经元细胞核浓缩明显增多，细胞排列紊乱，结构不清 图1：各组大鼠大脑皮质HE染色结果（） GFAP免疫组化染色 正常对照组，GFAP阳性细胞为星形胶质细胞，细胞轮廓清楚，星状突起纤细，GFAP分布于胞浆及星状突起中。20%浓度组海马和皮层GFAP阳性细胞数增多，突起增多增粗，整个细胞形态类似蜘蛛状，细胞形态变得不规则。50%浓度组GFAP阳性细胞进一步增多，胞浆突起染色加深，细胞形态差异明显，突起粗而不规则。GFAP阳性细胞计数显示: 20%组7d内， 50%组各个时间点GFAP阳性细胞数明显多于对照组，与对照组比较有显著性差异(P0.05，P0.01)，见表2和图2。 表2 不同时间点大鼠GFAP阳性细胞数（xˉ±s） A：正常对照组（GFAP染色×400）；B：20%浓度组（GFAP染色×400）； C：50%浓度组（GFAP染色×400） 图2：各组大鼠大脑皮质GFAP的表达 3 讨论 近来人们发现星形胶质细胞（Astrocyte; AS）Central nervous system, CNS）的病理性损害起应答反应[3]，损伤部位常由星形胶质细胞进行修复。目前已经公认胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）是星形胶质细胞的标志蛋白[4]。人们也