以原核表达的猪δ冠状病毒N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立.pdfVIP

第 38 卷第 10 期 中国预防兽医学报 Vo l. 38 ,No. 1O 2016 年 10 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Oct. 2016 doi: 10.3969/j .issn.l008-0425.2016.10.08 以原核表达的猪 8 冠状病毒 N 蛋白为包被抗原的 间接 ELISA 方法的建立 张帆帆f ，宋德平 f ，郭楠楠，叶豆，周信荣，李安琪，张敏，彭棋， 陈燕君，黄冬艳，唐玉新. (江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌 330045) 摘 要:为建立检测血清中猪8 冠状病毒(PDCoV)抗体的间接ELISA 方法，本研究根据 PDCoV 的 N 基因序 列设计特异性引物，扩增出 N 蛋白全基因序列，将其克隆至低温表达载体pCold 1 中并转入 BL21 ，诱导表达获 得大小约为 41 阳的可溶性目的蛋白; western blot 试验表明所表达的蛋白具有反应活性。以纯化的重纽N 蛋白作 为包被抗1系，建立了 PDCoV 间接 ELISA 抗体检测方法。结果表明，本研究建立的 ELISA 方法阴阳性临界值为 0.316 ，与猪流行性腹泻病毒等 6 种猪常见病房、阳性血清均无交叉反应，具有良好的特异性。批内和批间重复性 试验的变异系数均小于 10 %，重复性和稳定性均较好。应用建立的间接 ELISA 方法，对收集自江西各地区 282 份猪血清进行检测，阳性率为 12.8 % (36/282) ，表明 PDCoV 在我省猪群中普遍存在。本实验建立的 PDCoV 抗体 捕获间接ELISA 为临床上猪群PDCoV 感染监测和流行病学调查提供了实验依据。 关键词:猪8 冠状病毒;N 蛋白;原核表达;间接 ELISA 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2016)10-0795-05 Establishment of a recombinant nucleoprotein-based ELlSA for detection of antibodies against newly emerged porcine deltacoronavirus t t ZHANG Fan-fan , SONG De-ping , GUO Nan-nan , YE Yu , ZHOU Xin-rong , LI An-qi , ZHANG Min , PENG Qi , CHEN Yan-jun , HUANG Dong-yan , TANG Yu-xin* (College of Animal Science and Technology , Jiangxi Agricultural University , Nanchang 330045 , China) Abstract: To establish an assay for detection ofthe serurn antibodies against porcine deltacoronavirus (PDCoV) , the complete nucleotide (N) protein gen币。fnewly emerged PDCoV was 缸nplified by a RT-PCR with a pair of specific primers targeting the N gene of PDCoV and cloned in