伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

• 6 • 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 2 期 生物技术 伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原双抗体夹心 ELISA 检测方法的建立及初步应用 张雅岭，王凯，陈芳玲，曾晓飞，吴文德，黄甜，李雪，朱丙伦，陈汉忠 (广西大学动物科技学院，广西南宁 530005) 摘要:试验旨在建立一种能鉴定水牛临床感染伊氏锥虫的方法。试验以纯化的伊氏锥虫 3 D7腹水单抗作为包被抗体， HRP 标记的伊氏锥虫 5B9 单抗作为第 2 抗体，建立了检测伊氏锥虫变异表面糖蛋白(variant surface glucoprotein ,VSG)抗原 的双抗体夹心 ELISA 方法，并进行了灵敏度、特异性试验及初步检测应用试验。结果显示，用该法检测阳性血清，1 3200 稀 释时其 D4~O nm 值仍大于阴阳临界值;交叉反应试验结果显示，其不与泰勒虫、弓形虫、衣原体、大片吸虫等抗原发生交叉反应， 表明该法具有良好的检测特异性;用该法检测了当地 82 份水牛血清，阳性率为 9.76% 。结果表明本研究建立的伊氏锥虫 VSG 抗原双抗体夹心 ELISA 方法检测灵敏度高、特异性好，能作为检测水牛临床感染伊氏锥虫的有效方法，对于临床伊氏锥 虫病的诊断和防控具有重要意义。 关键词:伊氏锥虫;变异表面糖蛋白(VSG)抗原;单抗;双抗体夹心 ELISA 文章编号:1671-7236(2014)02-0006-05 中图分类号:S855.9 文献标识码:A 情况，因此，建立→种检测伊氏锥虫抗原的方法，对 伊氏锥虫病是由伊氏锥虫 C Tryρanosoma 水牛伊氏锥虫病的诊断或流行病学监测都非常 evansi) 感染引起的一种世界范围广泛分布、发生于 必要。 多种动物的血液原虫病，多发于热带和亚热带地区， 本研究利用广西大学动物科技学院寄生虫学实 中国许多地区都有分布CLun 等， 1993) 。其能直接 验室制备和筛选鉴定的 2 个抗伊氏锥虫变异表面糖 引起动物的急性死亡或隐性感染，对中国畜牧业造 成极大危害。在南方地区，尤其在广西，伊氏锥虫病 蛋白(varia口t surface glucoprotein , VSG) 抗原的单 抗，建立了一种检测伊氏锥虫 VSG 抗原的双抗体夹 主要危害水牛(叶联，2000; 陈汉忠等，1984; 欧绍毅 心 ELISA 测定方法，为广西水牛伊氏锥虫病的诊 等，2003; 唐荣华等， 1998 ;黄邵斌等， 1995 ;蓝叙披 断、检测及血清流行病学调查提供有效的技术平台。 等， 1995) ，而广西是中国水牛养殖大省，水牛产业是 1 材料与方法 广西畜牧业的支柱产业，因此，做好水牛伊氏锥虫病 1. 1 材料 的防控工作对保障水牛养殖业的健康快速发展非常 1. 1. 1 试验动物、羊抗杂交瘤细胞、血清 BALB/c 重要。另外，国外还有伊氏锥虫感染人的报道，因此 小鼠购自广西医科大学实验动物中心;抗伊氏锥虫 伊氏锥虫病也是一种人畜共患寄生