以NF-κB为靶的药物筛选方法的建立与应用研究.pdfVIP

生住物化学与生t物物现进院 Progress in BiochemÜit厅，肌d Biophys ú;s, 2006, 33(2)‘ 149-154 PUJ叫 IJ IJ 以 NF.翩. 建立与应用研究* 马艳霞徐泼夜景荣王鹅关年学教 (北京大学天然药物与仿生药物院丢在就点实骏煮， 北京 10ω83) 摘要 核转录园子即KB (NF咐.B) 通过调节其靶装囚的表达，在机体免疫.1事、炎1íË与肿瘤的发生发照过程中发探辛辛i重要功 能，因此也被认为是说防和治疗肿瘤与炎症的遐想把点. pNiFty.搁 SEAP质粒被成功地转入HEK293 细胞，因此该转染细胞含 有以Nf-KB 辈辈序的增强子、自EAP 报告旅日盟和 ZeocÎn :bì::t贫苦抗做筛选慕即. Jlj立扮测报食基则表达水平面I反映NF-Kl3的治化 状态，在以 pNiFty刷SEAPIHEK293 细胞为基础建立的筛选体系巾， TNFa 和 PMA 驾车已知的 NF-Kl3激精剂自阶U!慧与时间依赖快 地促滋 NF-峭的活化，而PDTC 和 NAC 等 NF-悦目抑制剂的作用则相反该筛逃体系不仅具有稳定、特异、高通鳖辛辛特点， 而且可闷闷检测 NF-峭的激活JllJ与抑制剂，将J;J J主观作用于 NF-Kl3 信号怜导通路的抗肿瘤与免疫调节药物提供有先生的实验 方法 关键词 NF-Kl3，分泌现胎擞碱性磷酸酶，炎llE，肿?前，药物筛i! 学科分拨号 R965.1 核转录因子 -KB (nuclear fuctor-kappa B, 膜的提垦[2J 针对这也机制研制新观的分子靶点药 NF-KB) 混过调拨多种暴囚的表达，参与免疫反应、 物将为肿瘤利炎症防治开辟一条新的途径.凶此， 炎疲反戚、细胞凋亡、肿瘤发:1:与转移等多种生物 辛苦必姿建立快速生奇特异的 NF咐日活性检测方法， 波和(1.司在静思状态 f ， NF-KB 在胞浆内与其抑制 发现以 NF-K13为靶点的化合物 因:r IK13s 结合形成复合物，处于非湘化状态判 Moon 等问将 pNF-KB-SEAP幡NPT 质校转染入人 细胞受到各种细胞内外剌激阴素的作用时， IKBs 角化细胞株HaCaT 中， 1哀转染细胞能:tE NF咐自活 被IKB 磷酸化激酶复合物(IKK) 磷酸化后，与泛絮 化的情况下诱导分泌型胎:t1â碱性磷酸自尊 (SEAP) 报 2蛋白结合，再经ii 白酶体降解，从而使得NF蝇KB 偿基网的表达.政实验系统采用 SEAP 1J?)t底物对 释放出来，jf:进…步转位到细胞核内，处于m化状 人皮肤细胞NF-KB 活性进行量化检测，并且能巨变 态[31. 近年来随着分子生物学技术的发展，在研究 用于各种合成与天然化合物的筛选，发现治疗皮肤 NF-K13通路如何影响肿瘤细胞凋亡及如何决定其调 病的抗炎药物最近， Leun且等问向肝癌细胞 1 亡相关元1 j 的表达增强或抑制方面已取得一定进 (HepG2)转入荧光酶报告基因 pBIIX峭luc (包含有附 展越米越多的研究显示， NF-K8的话化使得细胞 个衔接的童复NF-KB 纣合t点点)和 p虹-TK 质校载 增殖与调亡之间的平衡被打破而倾向于抑制细胞搁 体.通过双荧光索酶报告基因检测系统来检测细胞 亡促使肿瘤细胞恶性变，因而在肿瘤的发生发展中