植物生理学实验 一、课程简介： 植物生理学实验是高等院校生物科学 .doc

植 物 生 理 学 实 验 一、课程简介： 植物生理学实验是高等院校生物科学专业开设的一门专业必修课程，该实验是植物生理学发展的基础和重要环节，是植物生理学理论通向农业生产实践的桥梁。实验课的主要任务是培养学生动手能力、观察能力、分析问题和解决问题的能力，促进创造性思维，同时培养学生科研意识及实事求是的科学态度和严谨的科学作风，为后续课程学习以及将来科研工作奠定坚实的基础。 二、课程性质：必修 三、面向专业：生物科学本科专业 四、课程主要内容及学时： 章节 内容 实验或实践课（学时） 备注 实验一 植物细胞渗透势的测定 3 实验二 TTC法测定植物根系活力 3 实验三 叶绿体色素的提取、分离和性质 3 实验四 叶绿体色素的定量测定 3 实验五 植物呼吸速率的测定 3 实验六 生长素类物质对根芽生长的影响 3 实验七 种子生活力的快速测定 2 实验八 脯氨酸含量的测定 3 实验九 植物组织中蛋白质含量的测定 2 实验十 过氧化物酶活性的测定 2 实验十一 电导法测定植物组织抗逆性 3 实验十二 水稻的延迟性低温伤害 选做 合计 30 五、考核办法：考查 六、学习要求： 掌握重点、难点及原理，会独立操作每一个实验，掌握各项实验技能，认真完成实验报告。 七、主要参考书及教材： 1、郝再彬等主编.《植物生理实验》.哈尔滨工业大学出版社.2006.2 2、李合生主编.《植物生理生化实验原理和技术》.高等教育出版社.2000.7 3、李秀霞等主编.《实践指导教程》.哈尔滨出版社.2004.8 实验一 植物细胞渗透势的测定（质壁分离法） 一、原理 将植物组织放入一系列不同浓度的蔗糖溶液中，经过一段时间后，植物细胞与蔗糖溶液之间将达到平衡状态。如果在某一溶液中细胞脱水达到平衡时刚好处于临界质壁分离状态，则细胞的压力势ψp将下降为零，此时细胞液的渗透势ψπ等于外液的渗透势ψπ′，即 ψπ＝ψπ′。此溶液称为该组织的等渗溶液，其浓度称为该组织的等渗浓度，即可计算出细胞液的渗透势。实际上临界质壁分离状态镜下很难看到，一般以初始质壁分离作为判断等渗浓度的标准。（细胞水势=渗+压+衬，其中渗=外渗=-iCRT）（注：内外浓度差不一定质壁分离，因为外高内低才会分离） 二、器材、试剂与材料 1、器材：显微镜，小培养皿（60mm）1、取干燥、洁净培养皿9套，顺序编号，顺序加入蔗糖系列标准溶液，呈一薄层，盖好皿盖。（为什么？） 2、用镊子撕取材料内表皮（0.5cm见方即可），吸去表面水分，迅速浸入上述培养皿中，每皿4—5片。 3、经20～30min（为什么等这么长时间？因为达渗透平衡）记录室温，同时从高浓度开始依次取出材料放于载片上，滴一滴同浓度的蔗糖溶液，盖上盖片，显微镜下观察。若所有细胞都发生质壁分离现象，则取相邻低浓度的材料观察，并记录质壁分离的相对程度。若有50％左右细胞发生初始质壁分离(即原生质体刚从细胞壁的角隅处分离)，则该浓度就是等渗浓度。若两个相邻浓度的材料中，一个未发生质壁分离，另一个发生质壁分离数超过50％，则两浓度平均值即为等渗浓度。 4、由所得的等渗浓度和室温计算细胞液的渗透势： ψπ＝ψπ′＝－iCRT(MPa)，其中： ψπ——细胞的渗透势，MPa； ψπ′——供试溶液的渗透势，MPa； C——供试溶液的浓度，moL/L； R——气体常数，0.008314·L·MPa／(moL·K)； T——绝对温度，(273十t℃)K； i——等渗系数，蔗糖为1。 四、注意： 1、显微镜的使用，切记先吸干片子再放镜下。 2、吸管不要串了，不能混用。 3、材料取下后要马上放入培养皿，否则干了。 五、作业： 计算渗透势并绘图（发生质壁分离、未发生质壁分离、发生初始质壁分离） 实验二 TTC法测定植物根系活力 一、原理 氯化三苯基四氮唑(TTC)是氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但经还原后即生成红色而不溶于水的物质（TTF）， 生成的红色物质比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体。植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸等得到增强。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。 二、器材、试剂与材料。 1、器材：分光光度计。 2、试剂：乙酸乙酯(分析纯)，磷酸缓冲液(1／15mol/L，pH7.0)，lmo1/L硫酸， 0.4mo1／L琥珀酸， 石英砂。 3、材料：水培或砂培小麦、玉米幼苗等植物。 三、操作步骤 1、称取根尖样品0.5g，放入10mL烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10ml，将根充分浸没在溶液内，在