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 试验菌浓菌液贮藏周期验证方案 文件编码： 项 目 姓 名 签 名 日 期 起 草 审 核 审 核 批 准 生效日期 年 份 试验菌工作菌贮藏周期验证1、验证计划 2、验证小组名单 3、验证方案 4、验证培训记录 5、验证附属记录 6、验证报告 7、验证合格证书 验证验证 50～100cfu/ml 枯草芽孢杆菌 2～8℃ 50～100cfu/ml 生孢梭菌 2～8℃ 50～100cfu/ml 铜绿假单胞菌 2～8℃ 50～100cfu/ml 白色念珠菌 2～8℃ 50～100cfu/ml 黑曲霉 2～8℃ 50～100cfu/ml 验证依据 《中华人民共和国药典》2010年版二部 验证方法与内容 验证方法：平皿计数法 验证内容 环境条件要求：所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区（生物安全柜）内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。 仪器设备：实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过121℃湿热灭菌至少30分钟。 名称 生产厂家 型号 校验情况 生化培养箱 电热恒温培养箱 自动台式灭菌器 电子天平 数字酸度计 生物安全柜 验证前准备： 验证用试验菌 均来自贵州省药品检验所 试验菌 项目 试验菌编码 代数 接种日期 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 铜绿假单胞菌 白色念珠菌 黑曲霉 培养基的制备： 名称 生产厂家 批号 营养肉汤培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 营养琼脂培养基 改良马丁琼脂培养基 以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。 稀释液的制备： 0.9％无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解至1000ml，121℃灭菌20min。 0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温80 0.5ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至1000ml，121℃灭菌20min。 菌原液制备： 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，经30-35℃培养18-24小时。 将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30-35℃培养18-24小时。 将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经23-28℃培养24-48小时。 接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，备用。 新制备原菌液计数 取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌的菌原液，用稀释液0.9％无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌用营养琼脂培养基计数；生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培养基计数；白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基计数。 取黑曲霉孢子悬液，用稀释液0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，用改良马丁琼脂培养基计数。 保存条件的确认 将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后，置冰箱（2-8℃）保存，原菌液一定时间计数一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。 各项计数结果见验证报告。 组织实施 验证机构的组成公司验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和确认结果进行评定、完成验证报告。 部门 部门职责 责任人 工作划分 质量部 方案起草、实施、书写报告 操作实施 质量部 取样、检验、出报告 操作实施 验证 委员会 方案审定、批准、实施、发放验证合格证 方案审核 方案批准  试验菌浓菌液贮藏周期验证报告 文件编码： 项 目 姓 名 签 名 日 期 起 草 审 核 审 核 批 准 生效日期 年 份 验证概