俞萍_试验二_遗传病基因突变分析.PPT

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2017-08-29 发布于天津
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俞萍_试验二_遗传病基因突变分析

* * 医学遗传学实验遗传病基因突变分析（SSCP）实验内容 7.5?l PCR产物冰水浴中骤冷10分钟混匀后，100?C沸水中加热变性10分钟加样电泳(140V,~2hr) 银染,约50分钟 7.5 ?l loading buffer （95%甲酰胺） 1.5ml离心管遗传病基因突变分析 2、聚合酶链反应加样（DMD） (P30) 双蒸水 17.8 ?l 10xBuffer 2.5 ?l MgCl2 2 ?l dNTPs 0.5 ?l Primer R+F (混合) 1.4 ?l DNA 模板 0.5 ?l Taq-DNA聚合酶 0.3 ?l 石蜡油 1滴实验原理: 1）DNA抽提 2）聚合酶链反应 3）单链构象多态性分析遗传病基因突变分析 1）DNA抽提核基因组DNA可以从任何有核细胞中提出 Agarose gel electrophoresis 双蒸水 10*Buffer MgCl2 dNTPs（ATP/CTP/GTP/TTP） Primer（引物）R + F DNA 模板 Taq-DNA聚合酶石蜡油 PCR 组分 2）聚合酶链反应聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外由引物介导的特定DNA序列的扩增方法. 变性：95℃,1min 退火：温度和引物有关延伸：时间和待扩增产物长度有关 72 ℃ for Taq Step 1 (1个循环) 94?C 5分钟 Step 2 (30个循环) 94?C 30秒 59?C 30秒 72?C 30秒 Step 3 (1个循环) 72?C 5分钟 3）单链构象多态性分析