甲磺司特对哮喘大鼠气道炎症及IL-5影响.pdfVIP

甲磺司特对哮喘大鼠气道炎症及IL-5 的影响 中 文 摘 要 目 的 在大鼠哮喘模型上观察甲磺司特（Suplatast Tosilate，IPD ）干预前后哮喘大鼠气道 炎症、肺组织白细胞介素5（Interleukin-5，IL-5 ）基因表达以及肺泡灌洗液 (bronchoalveolar lavage fluids，BALF)中 IL-5 的含量的变化，探讨甲磺司特在哮喘防治中的可能作用机 制。 方 法 1. 取雄性成年 SD 大鼠（4 周龄，体重 200±20g）50 只，分为五组：对照（Control ） 组、模型（Model ）组、布地奈德（budesonide ，BUD ）组、IPD 早期干预组即 IPD(A) 组和 IPD 晚期干预组即 IPD(B)组，各组 10 只。 2. 在实验 0 天(即致敏前)尾静脉采血测定外周血嗜酸性粒细胞 （eosinophil,，EOS ）总 数与百分比。除 Control 组以外的其余四组大鼠分别于第 1 天和第 8 天腹腔注射 10 ﹪OVA 混合液 1ml （含OVA 100mg、氢氧化铝 100mg 及灭活百日咳杆菌苗 5×109 个作为免疫佐剂）致敏。2 周后再进行激发，2 ﹪OVA 泵雾化吸入，10 分钟/次，每 天 1 次，连续 7 天，构建大鼠哮喘模型，Control 组致敏和激发均以生理盐水代替。 BUD 组每次激发前 BUD 泵雾化吸入，IPD(A)组和 IPD(B)组分别从致敏和激发阶段 开始予 IPD （50mg/kg.d）灌胃。 3. 末次激发 24 小时内麻醉动物，再次尾静脉采血测定外周血 EOS 总数与百分比，气 管插管后行气道高反应性（airway hyper responsiveness ，AHR ）检测；检测后立即 腹主动脉放血处死大鼠，取各组动物 BALF 及肺组织，分别测定 BALF 中炎性细胞 总数和 EOS 百分比、通过逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ，RT-PCR ）检测肺组织 IL-5mRNA 的表达、酶联免疫吸附试验法 （Enzyme linked immunosorbent assay， ELISA ）测定 BALF 上清液中 IL-5 的含量， 并分析 IL-5 与 EOS 、AHR 之间的相关性，结合肺组织病理学检查分析气道炎症状 态。 I 结 果 1. 大鼠哮喘模型的建立：与 Control 组相比，在激发过程中，Model 组大鼠逐渐出现烦 躁不安、挠鼻、呼吸急促、点头状呼吸、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖 毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应迟滞等哮喘样表现。激发 7 天后，Model 组大鼠 动物气道高反应性测定显示气道反应性增高，与 Control 组比较差异有统计学意义 （P＜0.05）；肺组织病理显示：气道周围明显炎症改变、支气管管壁增厚、管腔狭 窄,气道上皮细胞脱落，粘液分泌明显增加。BALF 细胞学显示 EOS 百分比明显增加 (P＜0.05)，提示哮喘大鼠模型复制成功。 2. 气道高反应性测定：各组大鼠用盐酸组胺激发，在同一激发浓度，Model 组、BUD 组、IPD(A)组和 IPD(B)组气道阻力明显高于Control 组 (P＜0.05) ,差异有统计学意 义；与 Model 组相比，BUD 组、IPD(A)组和 IPD(B)组气道阻力明显降低（P ＜0.05 ）， 差异有统计学意义。而 IPD(A)组与 BUD 组之间相比差异无统计学意义 （P＞0.05）。 3. 病理组织学检查：Model 组气道周围炎症改变明显、支气管管壁增厚、管腔狭窄， 气道上皮细胞脱落，粘液分泌明显增加。与 Model 组比较，IPD(A)组、IPD (B)和 BUD 组气道周围炎症明显减轻，气道周围炎症细胞浸润、气道分泌物减少、支气管 壁增厚及上皮细胞脱落现象明显改善。 4. BALF 细胞学检测：IPD(A)组、IPD(B)组和 BUD 组炎性细胞总数及 EOS 百分比明 显低于