间质细胞源性因子-1受体拮抗剂AMD3100对颞叶癫痫异常神经发生调控作用.pdfVIP

·中文论著摘要· 间质细胞源性因子．1受体拮抗剂AMD3100对颞叶癫 痫异常神经发生的调控作用 前 言 癫痫是最常见而严重的神经系统疾病之一，已被世界卫生组织列入全球重点 防治的五大神经精神疾病。流行病学调查显示，在我国癫痫患病率高达7％0，我 国现有900万以上癫痫患者，而且还以每年新发40万一60万例的速度递增。经正 规抗癫痫药物治疗，大多数病人的癫痫发作可得到控制，但仍有20-30％的病人癫 痫难以控制，最终发展为难治性癫痫，其中60％一70％为颞叶癫痫。颞叶癫痫以自 发的反复痫性发作，认知障碍和抑郁为其特征，是最常见的难治性癫痫类型。海 马异常的神经发生是颞叶癫痫模型的一个显著特征，包括苔藓纤维芽生，颗粒细 胞门区异位迁移，门区基底树突，突触重组等，这些病理变化被认为对大脑异常 活动起到促进作用。在颞叶癫痫的急性期齿状回的神经发生增强，而在慢性期神 经发生则明显地减低。这可能与新生细胞在急性期和慢性期所处的微环境的改变 cell．derivedFactor 有关。间质细胞源性因子．1(Stromal l，SDF-1)是骨髓基质细胞 产生的CXC类趋化蛋白，在生理状态下SDF．1与其特异性受体CXCR4高度表达 在侧脑室下区及齿状回颗粒细胞层卜．区这两个脑内主要的神经发生区域。近来有 结合后，与CXCR4相连的G蛋白被激活，并进一步激活下游的信号传导途径， 从而使细胞骨架发生改变，引起神经干细胞迁移、黏附，并调节神经干细胞的增 殖和分化。在癫痫、中风等形式的脑损伤后，主要由死亡或受损的神经细胞、活 化的胶质细胞及内皮细胞释放的SDF．1通过与CXCR4受体结合，能够吸引神经 干细胞迁移到细胞变性、死亡区域及炎症区域。如果能够改变癫痫后新生神经细 胞所处的微环境，从而调控异常的神经发生，可能会对癫痫尤其是难治性癫痫的 治疗起到更积极的作用。我们通过侧脑室注射海人酸致颞叶癫痫模型观察了 万方数据 CXCR4拮抗剂AMD3100对海马异常神经发生的影响。 实验方法 1、实验动物的分组：采用雄性Wistar大鼠，体重200．2509，由中国医科大学实验 (3)AMD3100组(n=5)。 acid，KA)的 2、颅内注射KA制作颞叶癫痫模型：采用颅内注射海人酸(kainic 方法制作颞叶癫痫模型。根据大鼠脑解剖图谱，用立体定位的方法将KA注射到 大鼠侧脑室制作模型。 3、微量渗透泵颅内给药：在造模后第1天或第61天，用立体定位的方法在颈部 皮下埋置灌注AMD3100的微量渗透泵，进行侧脑室内持续给药，连续7天。 时，连续2天，最后一次注射后24小时取材。 5、组织切片的制各：以上各组动物分别于造模后第10天或第74天用多聚甲醛 灌注固定，取脑，用恒冷切片机行连续脑冠状冰冻切片(片厚50pro)。 阳性细胞并测定海马门区异位迁移的颗粒细胞数及树突发育情况。 7、共聚焦显微镜成像：在共聚焦显微镜下获取海马齿状回区域DCX阳性细胞的 Z轴方向系列图层后，对新生神经细胞树突及轴突进行三维重建，然后使用NIH ImageJ软件对树突、轴突及其分支进行追踪描绘与测量，以观察DCX阳性细胞 的树突发育成熟情况。 8、行为学测试：应用Morris水迷宫实验对大鼠学习记忆功能进行定量评价。 9、脑电图记录：在造模后第72天进行脑电图描计，观察各组大鼠痫性发作频率 及平均持续时间。 10、统计学处理：实验数据以均值士标准差表示。数据分析采用统计分析软件 SPSSl7．0for windows进行。应用单因素方差分析或重复测量方差分析来判断差异 的统计学意义。 2 万方数据