TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法tunel完成.ppt

TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL) ??TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）法实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。 TUNEL 主要试剂 1. 缓冲液(Labeling Buffer)： 用于维持一定的反应条件，含有以下成分：500mmol/L二甲胂酸钾、 pH7.2 10mmol/L CoCl2 (氯化钴)、1mmol/L DTT(二硫苏糖醇)。 2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT) ： 催化3’-OH末端 dUTP反应的关键酶 3.荧光素-dUTP ： TdT的底物和本实验的标记物 4.蛋白酶K： 消化组织，增加细胞通透性 凋亡细胞的特征是:内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质DNA被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的 3’-OH末端 。末端脱氧核糖核酸转移酶(Termina