外阴恶性肿瘤中P21-ILK及HPV 6-11-HPV 16-18检测及意义.docVIP

外阴恶性肿瘤中P21\ILK及HPV 6/11\HPV 16/18检测及意义[摘要] 目的:探讨P21、ILK及HPV 6/11、HPV 16/18与外阴恶性肿瘤的关系。方法:P21、ILK用免疫组化SP法检测,HPV 6/11、HPV 16/18用原位杂交法(ISH)检测。结果:外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变(VIN)组、正常组中,P21、ILK的阳性表达率分别为40.00%(12/30)、52.38%(11/21)、0(0/10)和63.33%(19/30)、47.62%(10/21)、0(0/10);外阴病变各组P21、ILK的阳性表达率均显著高于正常组(P2 cm者22例。全部病例术前均无放疗、化疗史;病程1～5年;年龄30～83岁,平均56.5岁。外阴上皮内瘤变(VIN)21例,其中,VINⅠ 6例,VINⅡ 8例,VINⅢ 7例;年龄30～71岁,平均55.5岁。10例正常皮肤组织为对照组,其中,5例为外阴手术阴性切缘,5例正常外阴组织;年龄35～87岁,平均61.0岁。所有标本均经10%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,4 μm连续切片。 1.2主要试剂 一抗分别为鼠抗人P21单克隆抗体,鼠抗人ILK单克隆抗体,HPV 6/11、HPV 16/18原位杂交检测试剂盒(含生物素标记的HPV 6/11、HPV 16/18探针)和SP试剂盒。以上试剂均购自福州迈新公司。 1.3 实验方法 P21及ILK检测采用免疫组化SP法;HPV 6/11及HPV 16/18检测采用原位杂交法。实验步骤严格按说明书进行。 1.4 结果判定 P21及HPV 6/11、HPV 16/18均显示细胞核着色,光学显微镜下见到细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性染色;ILK在细胞内的阳性表达主要位于肿瘤细胞的胞质内,出现浅或棕黄(褐)色颗粒。评分方法:参照Fomwitz综合计分法并略加修改,行半定量分析:随机抽样在高倍镜下计数肿瘤细胞总数和阳性细胞个数,然后得出阳性细胞百分率,着色强度按多数阳性细胞呈现的染色程度分为4级:阴性(-),即阳性细胞数60%;中度阳性(++),即阳性细胞数介于弱阳性与强阳性两级之间。 1.5 统计学处理 数据经SPSS 10.0软件分析,用行×列联表χ2检验,各指标的相关关系用Spearman等级相关分析,P0.05)。见表2。 表2 HPV 6/11、HPV 16/18在各组中的感染情况 2.3 HPV 6/11、HPV 16/18与P21、ILK的关系 HPV 6/11、HPV 16/18感染组中P21、ILK的阳性表达与无感染组比较,无显著性差异(P0.05)。见表3。 表3 HPV 6/11、HPV 16/18感染与无感染者P21、ILK的检测(例) 2.4 P21与ILK、HPV 6/11、HPV 16/18的检测与外阴恶性肿瘤的临床病理特征及其相互关系 P21、ILK和HPV 6/11、HPV 16/18的阳性表达率与肿瘤大小、组织类型、鳞癌的病理分级、临床分期及淋巴结是否转移无关(rs=-0.022,P0.05)。HPV 6/11、HPV 16/18与ILK和P21的表达无相关性(rs=-0.020,P0.05),ILK与P21的表达也无相关性(rs=-0.015,P0.05)。 3 讨论 p21基因是CIP家族中的一员,它是位于p53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子。p21可以和p53共同构成细胞周期G1检查站,因DNA损伤后不经过修复则无法通过,减少了受损DNA的复制和积累,从而发挥抑癌作用[2-3]。p21可以通过细胞周期调控作用间接参与细胞凋亡(依赖p53途径)和直接导致细胞异化恶变(非依赖p53途径),可以正性调节细胞依赖性激酶功能,抑制PCNA与多聚酶γ结合,影响DNA复制和抑制应激蛋白激酶活性,可作为肿瘤分化程度及临床分期的参考指标之一[4]。 ILK是新近发现的一个具有3个结构单位的Ser/Thr蛋白激酶,作为整合素和生长因子受体信号传导途径中的一个重要效应物,ILK调节着细胞的黏着、生存、分化和凋亡[5]。其相关蛋白PKB、GSK3等是细胞程序性死亡和细胞周期循环的重要调节蛋白[6-7]。这些原因使得ILK与肿瘤的形成、浸润、转移和临床预后等密切相关。目前,ILK的功能紊乱在肿瘤发生中的作用仍有大量的理论问题有待解决[8-12]。 本研究结果表明,在各级VIN中均有P21及ILK表达,且阳性产物定位于非典型区,推测在异常细胞增殖的转化过程中,已有ILK及p21基因的扩增,并可通过蛋白水平检测出来。ILK在外阴恶性肿瘤中的阳性表达率明显高于VIN组,表明从