食品分析第二章光谱及色谱分析.ppt

第二章 光谱及色谱分析 一、光谱产生的原理 室温下物质主要处在它们的电子能级和振动能级的基态。当不同能量的电磁波照射物质时，物质的分子或原子吸收一定波长的电磁波后从基态跃迁到激发态，然后这些激发态通过在各个方向上以相同的或较低的频率发射出所吸收的辐射，或者通过“无辐射”弛豫释放能量，一般在10-8s左右回到基态。 二、紫外-可见吸收光谱 1、概述 紫外-可见吸收光谱（ultraviolet-visible absorption spectra)是分子吸收紫外-可见光区10-800nm的电磁波而产生的吸收光谱，简称紫外光谱（UV）。 其中10-190nm为原紫外区（真空紫外区），190-400nm为近紫外区（石英紫外区），400-800nm可见光区。 分子中价电子经紫外或可见光照射时，电子从低能级跃迁到高能级，此时电子就吸收了相应波长的光，这样产生的吸收光谱叫紫外光谱。 可以跃迁的电子有：?电子, ?电子和n电子。跃迁的类型有： ?? ?*, n ? ?*, ? ? ? *, n? ? *。 紫外-可见吸收光谱的特点 测量灵敏度和准确度高； 应用范围广； 对多种金属元素和非金属元素及其化合物都能进行测定 能定性或定量测定大部分有机化合物； 仪器价格便宜； 操作简单快速。 2、基本原理 通过测定吸收池中溶液对某个波长范围单色光的吸收强度，可以获得紫外-可见吸收光谱。实际的波长范围是190-400nm(紫外区)和400-780nm(可见光区)。 吸光度A： Lamder-Beer定律： A正比于光[吸收池厚度b(cm)]、溶液浓度c(mol/L)以及摩尔吸光系数ε[L/(mol·cm)]。 对于给定的体系，在低浓度(c≤0.1mol/L)时，A和样品浓度之间存在线性关系。但在高浓度时，由于样品内分子间距离变小，其相互作用增强并影响电荷分布，这种分子间的微扰明显地影响待测组分捕获特定波长的能力， ε可能发生变化，使之偏离线性工作曲线。 3、仪器 （1）光度计 单道系统：仅用一个检测器，单色器缓慢扫描通过光谱时，它依次测量每一个分辨单元的强度。高分辨率时对应较窄的狭缝，200-400nm用氘灯，400nm以上用钨灯。 多道系统：阵列检测器（n个硅二极管），所有强度的光谱被同时测量，测量时间减小至1/n，信噪比增加 倍。 不需要窄的狭缝，200-800nm均使用氘灯。 （2）滤光片 在光度计中，用一个或多个干涉滤光片代替贵重的单色器元件，使得系统适合于在指定波长下的特定应用。 图2-4是典型的光纤光度计的实验装置，适用于可见光范围，不需要将样品装入吸收池再放入光度计，而是将光度计放在样品中，进行原位样品测量。 4、操作条件 （1）样品制备 样品需要有代表性 为了防止由于浑浊溶液的光散射所产生的“吸收”，有必要先对溶液进行澄清处理。 参比池溶剂的选择 （2）分析操作 确定比色池 （3）测定波长的选择 最好选择在待测组分的最大吸收波长处测定，因为此处吸光度值不随波长变化，且灵敏度高，更符合Lamder-Beer定律。 5、标准曲线 根据标准曲线可确定待测组分的浓度与吸光度之间的关系，标准溶液最好采用与待测样品相同的试剂同时制备。 6、仪器误差对吸光度测定精密度的影响 （1）仪器误差：仪器噪声。 （2）在极高或极低的透光率范围内测定的误差较大，通常选用中间值的透光率测定。 （3）一般分光光度计上定量测定的最佳吸光度范围为0.2-0.8（或透光率15%-65%）。通常待测样品的吸光度应在小于1.0取值。 三、荧光光谱 1、概述 当紫外线照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的可见光，而当紫外线停止照射时，所发射的光线也随之很快地消失，这种光线称为荧光。 2、荧光光谱分析 荧光光谱法的灵敏度比一般的吸收光谱法高1-3个数量级，所测得的信号是待测组分由激发电子弛豫到其对应的基态时发射的电磁辐射。 激发和钝化过程是同时发生的。对每个单一分子体系，都有一个供样品激发的最佳波长和另一个用于检测荧光发射的更长的波长。用于激发和发射的波长取决于待测体系的结构和化学性质。 荧光仪和荧光分光光度计中包含两个波长选择器：一个用于激发光束；另一个用于发射光束。 当激发态的物质与气体分子碰撞时可产生荧光猝灭现象。 荧光束辐射能(PF): 其中：PF:荧光比色池产生的光束的辐射能； φ：荧光