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全自动生化分析仪原理与关键技术 报告人：王 炜 主要内容介绍 一、概述 二、生化分析仪基本分析原理 三、生化项目测定方法分类 四、临床生化项目分类 五、全自动生化分析仪关键技术 六、BS-300全自动生化分析仪介绍 二、生化分析仪基本分析原理 吸收光谱法（分光光度法） 透射比浊法 吸收光谱法（分光光度法） 分光光度法是一种灵敏、快速、准确、简单和具有较好选择性的分析方法。它在分析领域中的应用已有40年的历史。在这段时期内，虽然各种其他的分析方法有很大发展，但分光光度法仍是当今分析领域中应用最广泛的方法之一。它在分析化学、分析生化和医学检验中占有非常重要的地位。 透射比浊法 一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点(颗粒大小与光源波长接近)的悬浮液或胶体溶液时，其透射光强度I可用下式表示： I=IoeιL 式中，L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，则： Lg(Io/I)=KCL 与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础。 三、生化项目测定方法分类 终点法 固定时间法 动力学法 终点法(endpoint) 指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称“终点”法，更确切地说应称“平衡”法，这是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比 。 终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可。 固定时间法(fixed time) 固定时间法又被称为一级动力学法(first order kinetic)、初速率法(initial kinetic)、二点动力学法(two point kinitic)等。 在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加(或降低) 速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，且平衡常数不算很大，必需在特定时间段内进行监测。对于任何一级反应，反应开始后在一给定时间t的底物浓度〔S〕为： 〔S〕= 〔So〕e-kt 〔So〕是最初的底物浓度，e是自然对数的底，k是速度常数。 在t1到t2的固定时间间隔中，底物浓度的变化量Δ〔S〕与〔So〕的相互关系为： [So]＝(－△[S])/(e-kt1-e-kt2) 即在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度。这是一级反应的通性。该段时间内吸光度的增加(或)降低与被测定物的浓度成正比。 固定时间法方法学上比终点法要求高，所有影响反应速率的因素如pH、温度及酶量必须在两点分析中保持恒定，并准确定时，必须同时用标准液校正。 动力学法(kinetic) 动力学法即通常所说的零级动力学法，也被称为连续监测法。 指反应速度与被测定物浓度的零次方成正比，也就是与被测定物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。 实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再与酶活性成正比，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。 相关的几个术语 反应时间：指开始反应（终点法）或反应稳定（动力学法和固定时间法）到反应结束（终点法）或停止对反应监测（动力学法和固定时间法）的时间。 孵育时间：仅对双试剂测定有效，指从加入样本到加入第二试剂的时间。 延迟时间：仅对动力学法和固定时间法有效，指从加入样本（单试剂）或第二试剂（双试剂）开始反应到反应稳定的时间。 四、临床生化项目分类 按化学性质分： 酶类：包括ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK，CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE等。 底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，TBA，NH4+，CO2等。 无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl等。 特种蛋白类：包括apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。 按临床应用分 无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。 肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP