磺酸型生物缓冲剂的合成.docx

磺酸型生物缓冲剂的合成卞克建3张志炳郭宗煜(南京大学化学化工学院,南京210093)摘要通过用氯代乙磺酸钠与胺类反应,合成了几种重要的磺酸型双离子生物缓冲剂,并对其进行了分析。关键词生物缓冲剂,磺酸盐,合成111试剂与仪器1,22二氯乙烷(AR,上海化学试剂厂),无水亚硫酸钠(CP,宜兴市第二化学试剂厂),吗啉(9810%,南京化工厂),二乙醇胺(CP,上海化学试剂三厂),无水哌嗪(99%,进口分装),环氧乙烷(CP,上海化学试剂采购供应站)。Nicolet170SXFT红外光谱仪,Perkin2Elmer240元素分析仪,pHS22型酸度计,2W型阿贝折光仪。112合成实验11211氯乙磺酸钠的合成在装有机械搅拌器、回流冷凝管、滴液漏斗的1L三口瓶中、加入4411g(0135mol)无水亚硫酸钠、400mL水,搅拌,油浴加热升温到90℃以上。滴加3115mL(0.40mol)1,22二氯乙烷,40min内加完。保持回流温度在80℃左右,继续反应4h后冷却,将反应液减压蒸去水,至白色固体全部析出。此固体主要由产物、未作用的原料和生成的盐组成。在生物学研究中,研究培养对象的细胞介质、组织间隙以及生物大分子都要以培养液为营养源。在发生化学反应时,这些物质对培养基中的[H+]都有一定的要求,需要较稳定pH值的适用的生物缓冲剂。除了pKa值应合适外,通常还要求生物缓冲剂具有化学惰性、易溶于水而极少溶于有机溶剂、温度的影响及盐效应小的特点,并且还要易于合成。氨基磺酸型双离子生物缓冲剂可以满足如上大部分要求,国际上已得到了较多的应用1,2,但目前国内使用的各种生物缓冲剂还基本依赖进口。本文以较为廉价的中间体氯代乙磺酸钠与相应的胺作用,合成了几种重要的磺酸型生物缓冲剂,其pKa值在6～8之间,并对这些缓冲剂进行了分析。各个合成反应的方程式如下:ClCH2CH2Cl+Na2SO3ClCH2CH2SO3Na氯乙磺酸钠NH+ClCH2CH2SO3NaOONCH2CH2SO3H22(N2吗啉)乙磺酸(MES)将所得固体及500mL乙醇加入1L烧瓶(HOCH2CH2)2NH+ClCH2CH2SO3Na中,加热回流40min,大部分固体溶解,得到一悬浮液。趁热过滤,滤液冷却后,在0℃放置过夜。抽滤,红外灯干燥,得片状结晶5415g,收率(HOCH2CH2)2NCH2CH2SO3HN,N2二(22羟乙基)222胺基乙磺酸(BES)HNNH+2ClCH2CH2SO3Na394%。HO3SCH2CH2NNCH2CH2SO3H1121222(N2吗啉)乙磺酸(MES)的合成N,N′2二(22乙磺酸)哌嗪(PIPES)在装有机械搅拌器、回流冷凝管的250mL三口瓶中加入1815g(011mol)ClCH22CH2SO3Na·H2O,1715mL(0.2mol)吗啉和+HNNHOHNNCH2CH2OHClCH2CH2SO3NaHOCH2CH2NNCH2CH2SO3HN222羟乙基哌嗪2N′222乙磺酸(HEPES)Ξ1实验部分收稿日期:1995年11月27日。Ξ试剂介绍第19卷第3期卞克建等:磺酸型生物缓冲剂的合成163100mL水,搅拌,加热回流3h后冷却。减压蒸馏除去未作用的吗啉,剩余物溶解在300mL水中,用干氢型交换树脂层析柱去盐纯化。取一定量的干氢型交换树脂,加蒸馏水浸30mLNaOH,继续回流20min,此时反应液的pH值不再下降。冷却,用浓盐酸调至pH115,溶液立即变混浊,静置过夜。抽滤,称重算出其所含摩尔数,加入等摩尔数的NaOH溶液,晶体转化为一钠盐迅速溶解。再酸化至pH115,静置。抽滤、烘干得粒状晶体1210g,收率54%。11215N222羟乙基哌嗪2N′222乙磺酸(HEP2ES)的合成4在装有机械搅拌器、回流冷凝管、通气玻璃管的250mL三口瓶中加入8612g(1mol)无水哌嗪和80mL乙醇,搅拌溶解后,升温至80℃泡一昼夜。垂直架设一内径为215cm的玻璃柱,树脂层高35cm,用蒸馏水淋洗15min,将反应液上柱,控制滴速。用pH试纸检测流出液,开始时为无色,逐渐变为酸性,取一滴流出液,加2滴银铵溶液,有沉淀产生,证明有Cl-。收集全部酸性溶液,然后继续用蒸馏水淋洗,直至流出液变为中性。洗脱液中主要为目的产物及H+,C1-。用2mol?L盐酸淋洗柱子,此时,流出液为碱性,主要含Na+、剩余的吗啉等,与产物分离。当流出液再次变为酸性时,改用水淋洗至中性,此时树脂已经被再生为[H+]型。将酸性洗脱液减压蒸馏除水,得略带黄色的粘状液体,趁热加入50mL无水乙醇,立即析出白色晶体,开始回流。通气管另一端接一100mL圆底烧瓶,内装50mL环氧乙烷,逐渐通入反应瓶,用冰浴控制环氧乙烷通入速度,约1h内通完。冷却,减压蒸去乙醇,得红棕色粘状液