温莪术内生真菌gibberellamoniliformisezg0807诱变及其诱-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（５）：２３２９ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 温莪术内生真菌ＧｉｂｂｅｒｅｌｌａｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓＥＺＧ０８０７ 诱变及其诱变株遗传稳定性研究 严菊芬　齐宁波　王素萍　赵健烽　杨树林 （南京理工大学环境与生物工程学院　南京　２１００９４） 摘要　利用大梯度超导磁体（ＪＭＴ１６Ｔ５０Ｆ）模拟失重和超重环境对温莪术内生真菌 Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓＥＺＧ０８０７进行诱变，以期得到代谢产物活性高、遗传稳定性好的菌株。诱变２４ｈ、４８ｈ 和７２ｈ后，通过稀释涂布平板法得到１３９株诱变菌株；经滤纸片抑菌法初筛和ＭＴＴ法抗肿瘤细胞 活性实验复筛，筛选出高活性诱变菌株Ｍ７２２６。采用群体传代的方法考察菌株 Ｍ７２２６十代以内 菌株的生长状况和次级代谢产物抗菌抗肿瘤活性的能力。结果显示活性内生真菌ＥＺＧ０８０７经大 梯度超导磁体诱变，筛选得到一株代谢产物活性高、遗传稳定性好的诱变菌株Ｍ７２２６，为后续次级 代谢产物的分离纯化奠定基础，同时此法为真菌诱变育种提供了一种新的可供选择的方法。 关键词　诱变　超导磁体　内生真菌 中图分类号　Ｑ８１５ 　　直接从自然界中分离得到的野生型菌株积累代谢 产生的强磁重力环境作用时间持久、稳定性良好，为空 产物的能力往往较低，而且性状不稳定，容易退化，无 间生命科学研究的地基模拟实验提供一种可供选择的 法满足实际需求，这就需要利用育种方法对它们进行 新手段，目前在生命科学研究领域已有很多应用［３８］。 改造。其中，人工诱变是最常用的育种技术，该法简 　　利用大梯度强磁场超导磁体模拟重力环境对前期 单、快速、收效大，至今仍是被广泛使用的主要育种方 从温莪术根部筛选 得 到 的活性 菌株 Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ 法之一。研究和实践表明，空间诱变具有变异幅度大、 ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓＥＺＧ０８０７进行诱变，通过滤纸片扩散法初 有益变异多、有利于加速育种进程和改进品质等特点， 筛、ＭＴＴ法复筛得到高产诱变株，并对高产诱变株的遗 并在有效创造特异突变基因资源和培育作物新品种方 传稳定性进行评价，以期得到高产、稳定的活性诱变 ［１］ 面已经显示出重要的作用 ，成为培育新品种的有效 株，为后续菌株发酵液中活性物质的分离纯化奠定 途径之一。但因空间诱变技术成本高、实验机会少、技 基础。 术要求高等，而使通过航天器进行空间实验存在很大 的困难。因此，在地面模拟空间环境因素的试验研究 对于开展微生物诱变育种则显得尤为重要。 　　利用大梯度强磁场超导磁体ＪＭＴＡ１６Ｔ５０Ｆ（图１） 模拟重力环境对微生物进行诱变。该超导磁体作用原 理是利用梯度磁场对抗物质（水、蛋白质、脂类等）产生 的体积力作用，与物质本身重力相互抵消（失重）或加 强（超重），实现对物质所处表观重力的改变，因此可模 图１　超导磁体示意图［９］ ［２］ 拟失重到超重（０～２ｇ）的重力条件 。因其产生的磁 Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅｍｏｄｅｏｆｏｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ 场力与地球引力一样，是一种体积力，所以此超导磁体 ［９］ ｓｕｐｅｒｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇｍａｇｎｅｔ 收稿日期：２０１４０３１８　　修回日期：２０１４０３３０ 通讯作者，电子信箱：ｙｓｈｕｌｉｎ＠ｍａｉｌ．ｎｊｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ ２４ 中国生物工程杂志 ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．