茯苓原生质体融合育种与其发酵动力学的分析研究.pdfVIP

摘 要 茯苓隶属于真菌门，是一种药食两用菌。茯苓多糖是茯苓中一类具有广泛生理活性 的物质，具有较高的开发价值及良好的应用前景。 为了得到优良的菌株，提高菌株的多糖产量，提高发酵效率，我们对原菌株HD09-10 进行了原生质体融合育种和子实体培养的研究。并用液体发酵法培养茯苓菌丝体，从中 提取茯苓多糖，研究其液体发酵的条件和规律。 通过单因素试验，对原生质体制备的培养时间、酶解浓度、酶解温度、酶解时间、 酶解pH、稳渗剂等条件进行了研究。通过正交实验，得出其原生质体制备及再生的最适 宜条件：菌龄为二级液体培养4天，酶浓度3 %（其中蜗牛酶与溶壁酶的比例为2:1）， 酶解温度 36 ℃，酶解时间 2.5 h，酶解 pH 6.5，稳渗剂 0.6 mol/L。通过原生质体融 合筛选得到产茯苓多糖含量更高、生长速度较快，菌丝旺盛的菌株。对亲本和融合子进 行子实体的培养。从培养基成分、光照、培养温度、传代次数几个因素进行试验，对茯 苓菌株在实验室条件下形成子实体的最佳条件进行了探讨。实验结果表明,茯苓菌株在 PDA培养基下培养温度27 ℃,光照强度50 % ,培养时间18～30 d ,传代次数5～7代更 容易产生子实体。 在茯苓液体发酵中，通过培养条件和培养基的优化，探讨不同通气条件下茯苓最适 培养环境，以利于菌丝体生长及多糖的分泌，并分析多糖分子量的分布。 结果显示在茯苓液体发酵中加入 4%的橄榄油，在 26℃，转速 120 rpm 的条件，既 有利于菌丝生长，又有利于多糖的分泌。在发酵罐中培养，通气量为2 vvm时较佳，可 得到0.22 mg/mL的胞外多糖。 采用优化后的工艺条件，运用 Origin 软件进行数据处理，得到了茯苓发酵过程的 动力学数学模型和模型参数，同时对实验数据与模型进行了验证比较。在装液量3L/5L、 搅拌桨转速 120 r/min、接种量 8%和通气量 2 vvm 条件下,发酵得到胞外多糖浓度可达 到 37.54 mg/dL，模型计算与实验结果拟合曲线呈现一致，模型良好地反应了茯苓真菌 菌体及胞外多糖的发酵过程及其动力学机制。 关键词：茯苓,原生质体,多糖,动力学,液体发酵 I ABSTRACT Poria cocos which belongs to the eumycota is a kind of medicinal and edible mushroom. Pachman in Poria cocos is a kind of extensive physiological activity of the material. So the market demand is increasing. It is of high value of exploitation and good application prospect. In order to get more fine strains to improve the quantity of Pachman and enhance fermentation efficiency, the original strain(HD07-10) was studied experimentally about protoplast fusion breeding and fruit body training. The fermentation condition of Poria cocos is also studied by cultivating Poria cocos mycelium with liquid fermentation and extracting pachman. By single factor experiment, the research has been carried out on the conditions such as incubation time, enzymolysis concentration, enzymolysis temperature,