叶绿素的提取和叶绿素铜钠的合成于测定.doc

叶绿素的提取和叶绿素铜钠的合成与测定 实验目的和要求 从蚕沙中提取叶绿素并计算提取率 研究用叶绿素合成叶绿素铜钠的工艺条件 分析叶绿素铜钠产品的纯度、计算产率 实验原理 叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，它与蛋白质结合存在于植物的叶绿素的也和绿色的茎中，是植物进行光合作用所必须的催化剂，叶绿素难溶于水，而易溶于极性有机溶剂。 叶绿素有a和b 两种，a为蓝黑色结晶 叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，在叶绿素的结构中，含有一个由四个吡咯环和四个次甲基交替相联形成的卟吩环．卟吩环闭合的共轭体系提供了包围镁离子(或其它相似离子)的刚性平面． 叶绿素的结构如图l所示： 蚕沙中含有丰富的叶绿素，其纯含量达0.8—1.0%，居所有天然色素之首，故可用蚕沙来提取叶绿素，由于叶绿素易溶于乙醚、苯、丙酮、乙醇的脂性溶剂，故可用乙醇、丙酮混合液来提取。所得的叶绿素由于遇热、光、酸、碱等易分解，且又不溶于水。110度左右会分解，故把叶绿素制备成叶绿素铜钠，其性质更稳定溶解性也会有所提高。 叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被四所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐： Ｃ55Ｈ72Ｏ5Ｎ4Ｍｇ + 2ＮａＯＨ→Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4ＭｇＮａ2 + ＣＨ3ＯＨ + Ｃ20Ｈ39ＯＨ Ｃ55Ｈ70Ｏ6Ｎ4Ｍｇ + 2ＮａＯＨ→ Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4ＭｇＮａ2 + ＣＨ3ＯＨ + Ｃ20Ｈ39ＯＨ 在酸性条件下，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿酸： Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4ＭｇＮａ2 + 4Ｈ+ = Ｃ34Ｈ34Ｏ5Ｎ4 + Ｍｇ2+ + 2Ｎａ+ Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4ＭｇＮａ2 + 4Ｈ+ = Ｃ34Ｈ32Ｏ6Ｎ4 + Ｍｇ2+ + 2Ｎａ+ 叶绿酸可与铜盐在加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应生成叶绿素铜钠： Ｃ34Ｈ34Ｏ5Ｎ4+Ｃｕ2+ = Ｃ34Ｈ32Ｏ5Ｎ4Ｃｕ+ 2Ｈ+ Ｃ34Ｈ32Ｏ6Ｎ4+Ｃｕ2+ = Ｃ34Ｈ30Ｏ6Ｎ4Ｃｕ+ 2Ｈ+ Ｃ34Ｈ32Ｏ5Ｎ4Ｃｕ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4CｕＮａ2 + 2Ｈ2Ｏ Ｃ34Ｈ30Ｏ6Ｎ4Ｃｕ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4CｕＮａ2 + 2Ｈ2O 三. 仪器和试剂 （一）试剂： 蚕沙（50克） 95%乙醇 NaOH 溶液 稀盐酸 丙酮 石油醚 CuSO4 溶液 蒸馏水 40%乙醇 5%NaOH-乙醇溶液 pH试纸 磷酸盐缓冲液（pH=7.5） 取0.15mol/L磷酸氢二钠与同浓度的磷酸氢二钾以21：4混合 （二）仪器： 721型分光光度计，蒸馏装置,过滤装置,减压过滤装置,回流装置,分液漏斗装置，电子天平,电热恒温水浴锅及常用玻璃仪器等。 四. 实验步骤 蚕沙→浸取→过滤→浓缩→皂化→萃取→调酸→铜代→调酸→过滤→成盐→洗涤、干燥→产品 （一）叶绿素铜钠的合成 1. 叶绿素的提取： （1）在500ml圆底烧瓶中，先加入50g干蚕沙，再加入95%乙醇100ml。 （2）将反应瓶用水浴加热，使水浴温度不超过80℃（防止叶绿素a和b分解），浸泡提取3小时，，滤出提取液。 （3）按步骤2用乙醇重复2次。 （4）合并3次提取液，在减压下蒸出乙醇。 趁热倾出瓶中液体，冷却至室温，得到墨绿色膏状物（叶绿素粗品，不宜久置）。 2. 皂化： 将浓缩液置于带搅拌子三口烧瓶中，用5%NaOH-C2H5OH溶液调节使其p H等于11，用水浴加热在60℃下皂化回流1-2小时。 3. 萃取： 将皂化液冷却后转入分液漏斗加入等量石油醚萃取除去杂质（黄色）静置分层，下层为可溶性叶绿酸盐（绿色），取下层溶液，上层溶液用旋转蒸发器蒸发回收石油醚。平行萃取3次。 4. 调酸铜代： 将下层溶液装入三口烧瓶中，往其中慢慢加入稀盐酸溶液调节pH值为7后，加入10%的硫酸铜2ml，搅拌均匀后，再用盐酸将溶液调节pH为2-3，在水浴60℃下保温搅拌1小时。 趁热过滤，滤渣先用水洗去，再用95%乙醇洗涤4次后抽干。合并滤液和洗液，加入等量的蒸馏水，析出叶绿素铜，静置4小时后过滤，滤饼依次用适量的纯水、40%乙醇及石油醚洗涤3次至石油醚层变为浅绿色，以除去其中的H+ 及残留的叶黄素和其他有机杂质。 5. 成盐： 洗涤结束后滤干，滤饼用丙酮溶解，搅拌，成盐（用滤纸法检验成盐情况：用玻棒点少许溶液放在滤纸上，滤纸不显绿色则说明完全成盐），将其在60℃下加热蒸发以除去水分得墨绿色结晶物，然后再在60℃下烘箱中烘干结晶物，即制得墨绿色光泽的成品（略有胺味）。 （二）叶绿素铜钠质量鉴定 1. PH：准确称取0.01（精确至0.0002克）g叶绿素铜钠溶于蒸