双重实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用.pdfVIP

4688 重庆医学 2016 年 11 月第 45 卷第 33 期 ·技术与方法· doi: 10. 3969/j. issn. 1671-8348. 2016. 33. 026 双重实时荧光 RT-PCR 法检测肠道病毒方法的建立及应用铃 许联红1 ，岳玉林2 ，王永仿1 ，楚 鹰1 ，蒋立新1 (1.江苏大学附属武进医院检验科，江苏常州 213002 ;2. 江苏省南京市儿童医院检验科 210008) [摘要] 目的 建立检测肠道病毒(EV) 和肠道病毒 71 型(EV71)的双重实时荧光 RT-PCR 法。方法 设计特异性引物和 探针，建立双重实时荧光 RT-PCR 反应体系，绘制标准曲线，对该方法的灵敏度、精密度等进行评价。收集 109 1f~ 临床手足口病患 者粪便和咽拭子标本用该法进行检测，并与 EV71 商品化试剂盒检测结采进行比较。结果 双重荧光 PCR 法建立的 EV 和 EV71 标准曲线相关系数(r) 均为 0.998; 该法检测 EV 和 EV71 的灵敏度分别达到 0.5 TCIDso/mL 和 0.05 TCID50/mL; 检测 EV 和 EV71 的批内精密度均小于 3% ，总精密度均小于或等于 4%; 对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测，显示了良好的特异 性。 109 例临床样本用该法检测出 84 例 EV 病毒阳性样本，其中 EV71 阳性 56 例，EV71 总阳性率为 5 1. 4%; 与羊重荧光 PCR 商 品化试剂盒的检测结果完全一致(P= 1. 000) 。结论 建立的双重实时荧光 RT-PCR 法灵敏度高、稳定性好，对手足口病的早期 高通量快速诊断具有重要意义。 [关键词] 手足口病E 肠道病毒;肠道病毒 71 型;双重实时荧光 RT-PCR [中图分类号] R512.5;Q93-33 [文献标识码] A [文章编号] 1671-8348(2016)33-4688-03 Establishment and application of dual real-time fluorescent RT-PCR method for detection of Enterovirus骨 Xu Lianhong 1 ,Yue Yulin 2 ,Chu Ying 1 ,Wang Yongfang 1 ,]iang Lixin 1 (1. Department of Clinical Laboratory , Affiliated Wujin Hos户tal of ] iangsu Un叩旷日ty ， Changzhou , ]iangsu 213002 ,China; 2. Depa付ment of Clinical Laboratory , Nanjing Municiμ1 Childrens Hosρital ,Nanjing , ] iangsu 210008 ， αina) [Abstract] 0崎配tive To develop a dual real-time fluorescent RT-PCR method for rapid detection of enterovirus(EV)and en- terovirus type 71(EV7 1). Methods Specific primers and probes were designed and the dual real-time fluorescent RT-PCR reaction system was established. The quantitative standard curve was drawn; its sensitivity and precision were evaluated. Feces and throat swab specimens of 109 clinical patients with hand foot and mouth disease were coUected and t