5-氨基乙酰丙酸.docVIP

光合细菌产生S}}l,基乙酞丙酸(ALA)的研究 摘要 从36个光合细菌菌株中筛选出的7株紫色非硫红假单胞菌有产ALA能力，其中菌株99 28 ALA产量最高.用紫外线对菌株99 28进行诱变处理，筛选出产量比野生菌株高1倍多的菌株L -1.对影响菌株的生长和ALA产量的因子进行了探索.抑制剂加入时间和加入次数对ALA产量有显著影响.在最佳条件下(pH 7. 5,培养对数生长期加入ALA脱水酶抑制剂乙醚丙酸30 mmol, ALA生物合成前体甘氛酸30 mmol和琉泊酸30 mmol, 3 000 1、光照)，菌株L -1的ALA产量可达22. 15 m到L. 关键词:ALA;光合细菌;乙醚丙酸;甘氛酸;琉泊酸 Abstract In the laboratory 7 strains of rhodopseudomonas sp were selected from 36 photosynthetic bacteria strains. Rhodopseudomonas sp strain 99一8 had the highest ALA production in these 7 strains.Rhodopseudomonas sp 99 28 strain was mutated using ultraviolet radiation and a mutant strain L-1 was obtained, in which ALA production was higher than wild strain 99一8 by about 100%·The elements which affect strain 99 28 and L-1 ALA formation were studied. Under the optimal condition of ALAformation(pH of 7. 5, in the condition of supplementation of ALAD inhibitor LA and precursors glycineand succinct, and light 3 000 lx) ALA formation of mutant L-1 was as high as 22. 15 mg/L. Key words: ALA; photosynthetic; bacteria; LA; glycine; succinct 5氰基乙酞丙酸(5 aminolevulinic acid)，以下简称ALA，是叶琳、(亚铁)血红素和维生素Biz的类似物[i. z}.近年来，5氰基乙酞丙酸(ALA)作为一种无公害绿色的除草剂而备受关注[31.另外，ALA作为一种光动力学剂(photodynamic agent)，可用作杀虫剂、抗微生物药剂、植物生长促进剂及用于治疗癌症与其他疾病[z}.光合细菌生物合成ALA因工艺简单、产率高，具有工业化生产潜力，且ALA对人畜无毒性，在环境中易降解无残留，因而倍受国外研究者及产业界的关注. 自然界中很多微生物可合成ALA，但产量较低[;} . 70年代日本率先开展了这方面的研究，并应用生物工程方法获得了ALA高产重组菌株[a}.国内还没有这方面的研究.本实验利用现有的光合细菌菌株资源，筛选、选育高产ALA菌株，探索影响ALA产量的影响因子及操作条件. 1材料与方法 1.1菌株来源 本实验室保存的36株光合细菌菌株分属于Rhodobacter, Rhodopseudomonas，是1997年以来从不同水域取样，经多次富集培养，分离纯化所得.诱变菌株L一是以分离纯化得到的野生菌株 99 28经紫外线诱变得到.菌株99 28属于Rholopseulomonas. 1. 2培养基制备和培养条件 1. 2. 1分离培养基采用GM培养基 L浴氨酸钠4. 83 g/ L, DL萍果酸2.7 g/L，I}zHPOa·3 Hz0 0. 65 g/ L, I}HzPOa 0. 5 g/ L, ( N H4) z HP04 0. 8 g/ L,[NH4HzP04 0. 696 g/L]，大量金属元素:M gS04·7 Hz0 0. 2 g/ L，CaCI 2Hz0 5. 3 X 10- zg/ L, M nSOa 5 Hz0 1. 2 X 10- ;g/ L，生长因子:泛酸VB}生物素，酵母膏 0. 2% 1 .2. 2 微量元素，pH 7. 0^-7. 2. 培养条件 100 m L血清瓶中加入60 m L液体培养基，10 mL培养40 h的菌液，3 000 r/ min离心后得到的湿菌体接种入血清瓶，30