基于PCR反向斑点杂交技术的32型生殖道人乳头瘤病毒基因分型方法的建立.pdfVIP

.648. 临床检验杂志2015 年9 月第 33 卷第9 期 Chin J Clin Lab Sci ,Sep. 2015 ， Vol.刀， No.9 DOI: 10. 13602/j. cnki. jcls. 2015. 09. 03 ·临床检验执木研究· 基于 PCR 反向斑点杂交技术的 32 型生殖道人乳头瘤 病毒基因分型方法的建立* 黄学文l ，赵琪2 ，赵兰静l ，未菊平1 ，吴玉梅1 ，潘杰1 (1.华东疗养院检验科，江苏无锡 214065; 2. 南京医科大学 附属无锡人民医院检验科，江苏无锡 214023 ) 摘要:目的 建立基于 PCR 反向斑点杂交技术(PCR-RDB) 的 32 型生殖道人乳头瘤病毒(HPV) 基因分型方法。方法 设计 并合成基于MY09/1J 的 HPV 型特异性引物和探针;以 HPV 载体和临床样本为模板，用自建的 PCR-RDB 法对300 例临床宫颈 脱落细胞进行HPV 分型检测，并与商品化的 PCR-RDB 法检测结果进行比较。结果 自建的 PCR-RDB 法的特异性、准确性和 重复性良好，其对39 和 51 型 HPV 的最低检测限为 50 拷贝/反应，其余各型别 HPV 最低检测限为 5 拷贝/反应。用自建的 PCR-RDB 法对3∞例临床样本进行 HPV 分型的总阳性率、单一感染率和多重感染率分别为 18.679毛 (56/300) 、 12.33% (37/ 300) 、6.339毛(19/300) ，与商品化试剂的检测结果均无统计学意义cl 分别为 0.744 ， 0.597 和 0.118 ， P 均 0.05 )。两法一致 性检验的 Kappa 值为 0.889(P0. 0l)。结论 成功建立了灵敏度、特异性高，重复性良好，适合临床上对32 型 HPV 分型的 PCR-RDB 法。 关键词:聚合酶链反应;反向斑点杂交;人寻L头瘤病毒:基因分型 中固分类号:R33 1. 143 文献标志码:A Establishment of a genotyping method for the detection of 32 types of genital tract human papillomaviruses based on a PCR reverse dot blot array HUANG Xue-wen , ZHAO Qi2 , ZHAO Lan-jing 1 , ZHU Ju-ping l , WU Yu-mei 1 , PAN Jie (1. Department of Clinical Laboratory , Hua- dong Sanatorium , Wuxi 214065 , Jiangsu; 2. Department of Clinical Laboratory , Wuxi People I s Hospital Æ庐liated to Nanjing Medical Unù少ersity ， Wuxi 214023 , Jiangsu , China) Abstract: Objective To establish a genotyping method for the detection of 32 types of genital tract human papillomaviruses ( HPV) based on a PCR reverse dot blot(PCR-RDB) assay. Methods HPV genotype-specific primers and probes based on MY09/11 were designed and synthesized , and a genotyping method based on PCR-RDB 胃as established. Then , the established method was evaluated by HPV vector and used to detect the types of 300 clinical cervical cells samples.ηle obtained results were compared with