蛇毒的代谢动力学研究概况.PDF

蛇毒的代谢动力学研究概况 王 晴 川 (福建医科大学药理教研组) 蛇毒的毒理学研究正日益受到重视，不但中毒的机理需要解决，解毒药的寻找亦要有毒 理学基础。作为一类具有许多强烈特殊药理作用的多肽和蛋白质的蛇毒，目前且已成为探索 生理和生化规律的一种有力工具。由于对其毒理的逐渐深入了解，近来更引起将其用于治疗 某些疾病的临床兴趣。蛇毒的这些领域的研究，都需要解决一个问题，即它们在动物体内的 吸收、分布和消除的规律。本文拟就研究方法和国内外在这方面的研究概况作个简要的介 绍。 一、研 究 方 法 蛇毒组分主要为蛋白质和多肽，在追踪其在动物体内的吸收、分布和消除过程中不能用 化学方法测定，它和研究其他蛋白质性物质一样，现主要用放射性同位素标记和酶标记的方 法作为定量测定的示踪手段。 (一)同位素示踪方法 1．标记 有体外标记和体内标记方法。 (1)体外标记方法 常用的放射性同位素有131 125 3 I、 I和 H等。 131 125 a) I和 I 新生的放射性碘主要标记在蛋白质或多肽的酪氨酸上，但亦可标记在组 氨酸上，如Sato等对半环扁尾海蛇(Laticauda semifasciata)的 常用的有氯胺T (chloramine)法、电解法、乳过氧化酶( 已作为标记蛋白质常规使用的是Greenwood等的氯胺T法，它可以获得高放射比的标记物。 McFarlane的一氯化碘(Iodine monochloride)法则已较少用。 131 125 Greenwood等氯胺T法的基本原则是用无载体Na I或Na I和欲标记的蛋白质反应， 以氯胺T为氧化剂，经一定时间后，用焦亚硫酸钠终止反应，最后用G—25或G—50葡聚糖凝胶 过滤以分离游离碘。氯胺T法的一个重要问题是氧化剂氯胺T的用量。用量少，离子碘氧化 不够，标记率不高，用量大则可因过度氧化而损伤被标记的蛋白，使其免疫反应性和稳定性 均受影响。Hunter发现，蛋白质与碘结合率主要取决于反应液中的氧化还原电位，而氧化 还原电位又决定于氯胺T的用量。不同蛋白质的最适氧化还原电位是不同的，因此所需的氯 胺T量亦不同。作者因而设计了一种用测定氧化还原电位以确定氯胺T的最低用量的方法来 24 125 对蛋白质进行 I标记，获得较满意的结果。 乳过氧化酶法 由于氯胺T法存在的缺点，许多作者开始用乳过氧化酶法标记多肽类激 素。此法用乳过氧化酶和过氧化氢作为氧化剂，可以减少对蛋白质的损伤，其标记部位都是 行标记比较，均证明酶法在保持标记物的免疫反应性及化学稳定性上均比氯胺T法好。Rocbt 毒的毒素1，在微量(5微克毒素)标记中获得放射比高达2000居／毫克分子(280微居／微 克)的标记物，在较大量(200微克)的标记中亦达到l～1.5居／毫克分子的放射比。Elde- toxin)，获得满意结果，且为纯化提供方便(因无杂质污染问题)。 电解法 是在以丰透膜分隔的电解小室中，把放射性碘离子置阴极，蛇毒溶液置阳极进 行电解，电解后阳极的新生放射性碘即与蛇毒中的酪氨酸反应而将其碘化。此法亦不易损伤 125I标记蝎毒，标记物的放 蛋白，但标记物的放射比不高。 Ismail等应用Rosa等的方法用 射比为7.5微居／毫克。Gumaa等用同法标记非洲的噝喹 5.2微居／毫克，其电泳图和放射自显影图象基本相似。 3 3 3 3 b)H H的简单标记方法是Wilzbach的H 气体曝射法，即只要把 H通入待标记物的薄 层中使其进行交换即可。Huang用此法 菱斑响尾蛇(Cro