第4章 萃取法.ppt

2．乳化剂分子空间构型的影响 截面积小的一头指向分散相，截面积大的一头指向分散介质，所以一价金属皂形成O／W型乳状液，而二价金属皂形成W／O型乳状液 4．容器壁性质的影响 亲水性强的容器易得O／W型乳状液，亲油性强的容器易形成W／O型乳状液。 4、加热 布朗运动↑ 絮凝↑ 粘度 ↓聚结↑ 膜破裂↑ 5、吸附法破乳 吸附介质对油水吸附能力差异引起破乳 6、高压电破乳 扩散双电层破坏+阈电压的瞬间聚结作用 7、稀释法 稀释乳化剂 相图是一根双节线,?把均匀区和两相区分隔开来。? 当成相组分的配比取在：线的下方时，为均相区；?曲线的上方时，为两相区；在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为浑浊。? 相图中TMB称为系线；T代表上相组成；B代表下相组成；同一条系线上各点分成的两相具有相同的组成，但体积比不同。? VT?/?VB???=?BM?/?MT 在系线上所有点的总浓度不同，但是均分成上下相的组成是相同的，只是上下相的体积比不同，系线越长上下相的差别越大。 注意：两种高聚物之间形成的双水相并非一定都是液相，其中一项可以是固体或凝胶状 PEG≤1000 与dextran 形成固态凝胶相 * * 二、双水相萃取的基本概念 （一）相图 相图右上部为两相区，左下部为均相区，两相与均相的分界线叫双节线。组成位于A点的系统实际上由位于C、B两点的两相所组成，BC称为系线。 * * 当系线向下移动时，长度逐渐减小，表明两相的差别减小，当达到K点时，两相间差别消失，K点称为临界点。 * * 图1 A-B-双水相体系相图 上相组成用T点表示，下相组成用B点表示，由图1可知上下相所含高聚物有所偏重，上相主要含B，下相主要含A。曲线TCB称为节线，直线TMB称为系线。结线上方是两相区，下方为单相区，若配比取在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为混浊。 * * 组成在系线上的点，分为两相后，其上下相组成分别为T和B，T、B量的多少服从相图的杠杆定律。即T和B相质量之比等于系线上MB与MT的线段长度之比。又由于两相密度相差很小，故上下相体积之比也近似等于系线上MB与MT线段长度之比。 * * （二）分配系数 在双水相系统中，溶质与相介质的作用复杂：有氢键、离子键、疏水作用、范德华力、构象效应等 影响分配系数的因素包括很多，如粒子大小、疏水性、表面电荷、粒子或大分子的构象、温度等，这些因素微小的变化可导致分配系数较大的变化，因而双水相萃取有较好的选择性。 * * 分配系数K与溶质的浓度和相体积比无关，主要取决于相系统的性质、溶质表面性质和温度： * * 三、影响双水相萃取的因素 （一）、成相高聚物的分子量 一般原则:对于给定的相系统，如果一种高聚物被低分子量的同种高聚物所代替，被萃取的大分子物质,如蛋白质、核酸、细胞粒子等，将有利于在低分子量高聚物一侧分配。 * * 即当成相高聚物浓度、盐浓度、温度等其他条件不变时，被分配蛋白易被系统中低分子量的高分子吸引而被高分子链的高聚物排斥！ PEG分子量增大，或Dextran 分子量减小则蛋白的K减小 * * 但是K主要取决于被分离物质的分子量！ 小分子物质K受高聚物分子量的影响较小 如以Dextran 500(MW 500 000)代替Dextran 40（MW 40 000）,即增大下相高聚物的分子量，被萃取的低分子量物质如细胞色素C分配系数增加并不显著。然而，被萃取的大分子量物质，如过氧化氢酶的分配系数可增大到原来的6~7倍。 * * （二）成相聚合物浓度 ——界面张力 一般来说，双水相萃取时，如果相系统组成位于临界点附近，则蛋白质等大分子的分配系数接近于1。高聚物浓度增加，系统组成偏离临界点，蛋白质的分配系数也偏离1，即K＞1或K＜1 * * （三）、电化学分配 ——盐类的影响 盐对带电大分子的分配影响很大。各种盐的分配系数存在着微小的差异，产生了相间电位。由于蛋白质等大分子在水溶液中常带有电荷，相间电位造成的静电力能影响所有带电大分子和带电细胞粒子在两相中的分配。例如，DNA萃取时，离子组分微小的变化可使DNA从一相几乎完全转移到另一相。 * * （四）、疏水效应 选择适当的盐组成，相系统的电位差可以消失。排除了电化学效应后，决定分配系数的其它因素，如粒子的表面疏水性能即可占主要地位。成相高聚物的末端偶联上疏水性基团后，疏水效应会更加明显，此时，如果被分配的蛋白质具有疏水性的表面，则它的分配系数会发生改变。 * * （五）、温度及其它因素 温度的影响是间接的，它主要影响相的高聚物组成，只有当相系统组成位于临界点