特异性单抗ScFv-PE40重组免疫毒素探究进展.docVIP

特异性单抗ScFv-PE40重组免疫毒素探究进展 　摘　要：免疫毒素是一种由导向分子 (载体 )和细胞毒性分子 (毒素 )偶联的具有特异性细胞杀伤能力的杂交分子。由于其独特的作用，被广泛应用于杀灭肿瘤细胞领域的肿瘤免疫治疗。目前，国内外寄生虫的免疫预防应用重组毒素已做了大量的研究，本文就其组成、历史、以及近些年来在寄生虫病免疫防治中的应用进行了综述，为重组毒素在寄生虫领域提供一个理论为进一步应用。 毕业论文 关键词：单链抗体 免疫毒素 研究 　免疫毒素是利用基因工程技术融合载体和毒素的弹头，获得特异性的细胞毒作用的杂合分子，包括靶向部分与毒性部分。近年来由于生物工程技术的迅速发展，人们逐渐在基因水平为抗体分子变换准备了一系列的基因工程抗体（例如单链抗体）。在此基础上发现许多毒素基因结构，基于抗体与毒素转化，构建了重组毒素。 1 特异性单抗 　免疫反应是机体对疾病的抵抗力的重要因素。当动物体被抗原刺激后能产生抗体。抗原决定簇决定着抗体的特异性，不同的抗原分子具有不同的抗原决定簇。因此，所产生的抗体是多种抗体的混合物。传统的方法制备抗体的效率较低、得到的产量有限，而且分离这些不同的抗体是非常困难的。 　基因工程抗体的发展使人们可以通过抗体的人类改造，克服一些完整抗体的缺陷。目前通过对完整抗体人为改造生成的抗体有嵌和抗体、单域抗体、单链抗体（ScFv）、二硫稳定的Fv和分子识别单位等，其中单链抗体（ScFv）是目前应用最为广泛的重组抗体。 1988年Huston等人开始对ScFv进行研究，证明其具有抗体活性并且具有原来相同抗体的特异性。随后，大量的ScFv及其融合蛋白被研制成功，并分析得出其特性，在动物模型中进行初步应用。 2 蛋白毒素 　天然蛋白毒素从其来源可分为植物，细菌和真菌的蛋白质毒素等，其中，细菌蛋白毒素的结构具多样性，可以激活G蛋白，导致细胞功能障碍。细菌外毒素：主要是绿脓杆菌外毒素（PE）和白喉毒素（DT），这是目前最常用的构建重组免疫毒素弹头类蛋白毒素。PE是一种毒性非常强烈的细菌外毒素，由绿脓杆菌分泌产生，一次给小白鼠静脉注射0.3μg的量，就能导致其24 h内死亡的现象。若是给单个细胞直接注入该毒素，仅仅几个分子的PE即可使细胞致死。因此，PE成为目前构建免疫毒素的首选理想药物。 3 免疫毒素的发展历程 　免疫毒素的发展，可按3个阶段来划分。第一代即传统免疫毒素是由抗体与完整毒蛋白化学偶联得来，即化学交联免疫毒素。第二代是由抗体的活性片段与单链RIP或双链毒素A链的化学偶联物，由于毒素B链的缺失，不存在非特异性结合。化学偶联法的产物分子量较大，制备困难且产量低，组织渗透性差，缺点比较明显。重组毒素作为第三代免疫毒素出现，利用基因工程重组技术，将单链抗体（ScFv）与突变形式的毒素蛋白（PE）克隆入高表达载体，在大肠杆菌BL21/D3中融合表达并纯化。因此，第三代免疫毒素又被称为基因重组免疫毒素。与第一代和第二代免疫毒素相比较，它的分子量较小，均匀性强，活性较高，且异源性偏低。利用改造的抗体与毒素构建重组毒素，表达带有特异导向基因的PE融合蛋白，使其特异性细胞毒性作用在体外得以显现，实现了免疫毒素向实用方面的飞跃。 4 重组毒素的抗寄生虫效应 　在寄生虫免疫防治方面，由于出现大量的耐药虫株，使得寄生虫病的免疫毒素导向治疗显示了良好的应用前景。疟原虫、锥虫、球虫等寄生性原虫的细胞膜表面有稳定的抗原表型，在哺乳动物它们寄生的生命周期均有胞外时期，因此可以使用特定的抗体和细胞毒性药物连接物攻击它们。原虫是属于真核细胞，它的蛋白质合成对毒素具有较高的敏感性。目前免疫毒素对寄生虫的作用已被一些学者开始逐步深入的进行研究。虽然已发表的实验资料仅是有限的几个虫种，但免疫毒素在治疗寄生虫病方面已显示其可能性。 4.1抗利什曼原虫效应 　抗利什曼原虫的药物数量极少，副作用很严重，迫切需要高效、安全的治疗方法来替代。前鞭毛体膜抗原单抗(McAb2H6一E3)与蓖麻蛋白A链偶联而可形成免疫毒素，利用体外毒性试验方法证明McAb—RTA可抑制、杀伤前鞭毛体。将免疫毒素与虫体孵育48 h后，在显微镜下观察可发现虫体变小，活动受限。同时McAb和RTA均有相同的抑制或杀伤前鞭毛体的能力。 4.2 抗枯氏锥虫效应 　枯氏锥虫寄生虫病由于在单核吞噬细胞和组织细胞内寄生虫体，使化学药物治疗该病效果较差。临床以对症和辅助治疗为主。Santana制备了2种免疫毒素（ITA和ITR）。利用体外实验体外实验证明，48μg的ITR孵育48 h后可使虫体至死。而相等量的ITA需经孵育54 h后，才能使虫体死亡。这个实验结果显示出免疫毒素对于枯氏锥虫具有杀伤作用，并且ITR对虫体的杀伤能力比ITA有优势。 　免疫毒素的抗寄生虫病研究