宫颈癌与KIR3DL1基因的相关性研究.docVIP

宫颈癌与KIR3DL1基因研究，，，，，贵阳医学院贵州 贵阳550004贵阳医学院 分子生物学重点实验室 贵州 贵阳550004摘 要 目的 探讨宫颈癌与KIR3DL1基因的相关性。方法 采用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）方法Touchdown-PCR扩增KIR3DL1基因。结果 病例组KIR3DL1基因频率显著低于对照组（P 0.05）结论 KIR3DL1基因缺失可能与宫颈癌的发生存在相关性。 关键词宫颈肿瘤；杀伤细胞；受体；KIR3DL1Abstract]Objective: To study the relation between cervical cancer occurrence and KIR3DL1 gene. Methods: Using PCR-SSP method And Touchdown-PCR method to amplify KIR3DS1 gene. Results: KIR3DL1 gene frequency was significantly lower in the patient group than in the control group. Conclusions: The absence of KIR3DL1 gene maybe relate to cervical cancer’s occurrence. [Key words]Cervix neoplasms；Killer cell ；Receptor； KIR3DL1 杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor, KIR)主要表达于NK细胞和部分T细胞的表面, 分为活化型和抑制型两种，可与靶细胞表面的MHC-Ⅰ类分子结合,传导激活或抑制信号,从而调节NK细胞的活性[1、2]。其编码基因位于人类染色体19ｑ13.42。2002年WHO建立了KIR系统命名的原基金项目： 贵州省科技厅科研基金项目资助 黔科合J字[2005] 2016号 贵州省科技厅科研基金项目资助 黔科合J字[2004] JN055资助 作者单位： 贵阳医学院贵阳医学院分子生物学重点实验室 贵阳，550004 作者简介: 研究方向：分子生物学 通讯作者: 单可人 贵阳医学院分子生物学重点实验室.550004 Email: hikerencn@ 则，目前命名的共有17个KIR基因亚型：抑制型9个：KIR2DL1-4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR3DL1-3；活化型6个：KIR2DS1-5、KIR3DS1；假基因2个：KIR2DP1、 KIR3DP1[3、4]。2005年Mary Carrington领导的一个研究组首次报道KIR基因与宫颈癌的发生存在相关性，活化型受体KIR3DS1基因的出现，尤其是当缺乏抑制型KIR-HLA配体对时，宫颈癌的发生率将提高[5]。人们对活化型受体基因亚型KIR3DS1和抑制型受体基因亚型KIR3DL1进行序列分析，发现它们胞外区有99%的序列相同，并且都位于框架基因KIR2DL4的3′端,提示KIR3DS1与KIR3DL1可能是位于同一座位的等位基因[5]。因此，本研究探讨抑制型受体基因亚型KIR3DL1与宫颈癌的相关性。 研究对象与方法 1．1研究对象 病例组：56例贵阳医学院附属医院住院宫颈癌病人，均经过病理结果证明，年龄（27岁~70岁）。均无自身免疫性疾病，其它恶性肿瘤及乙肝、丙肝、艾滋病毒感染病史。对照组：68例贵阳医学院附属医院体检无血缘关系的随机健康妇女，年龄（28岁~68岁）。病例组与对照组均为贵州汉族；病例组与对照组年龄经统计学分析无统计学差异（P0.05）；且病例组与对照组标本采集均采用知情同意的原则。 1．2研究方法 1．2．1基因组DNA 抽提抽取外周静脉血2 ml ，EDTA 抗凝，用经典-酚氯仿抽提法提取全血DNA，并进行DNA定量。 1．2．2PCR/ SSP 法 采用PCR/ SSP 法[6、7]设计两对引物分别在两个体系中扩增KIR3DS1基因，第一对上游引物5‘CGC TGT GGT GCC TCG A 3’,第一对下游引物5‘GGT GTG AAC CCC GAC ATG -3’,扩增片段长197bp；第二对上游引物5-‘CCC TGG TGA AAT CAG GAG AGA G -3’, 第二对下游引物5-‘TGT AGG TCC CTG CAA GGG CAA -3’, 扩增片段长181bp。(引物由上海Sangon 生物工程公司合成) 1．2．3内对照 参照参考文献[7]在HLA-DRB1第3内含子内设计，由上海Sangon 生物工程公司合成，这个引物无位点序列特异