生物化学试验指导书-生物在线.docVIP

《生物化学》实验指导书 适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程 生物与食品工程学院生物科学系 生物化学实验细则 为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实验组的同学不准进入实验室。 进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。 实验后，要及时完成实验报告。 2006年1月 目 录 生物化学实验细则···································1 目 录··············································2 实验1 蛋白质的沉淀、变性反应······················3 实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白·············6 实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量···11 实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量·············16 实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳······················20 实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定·················24 实验7 生物氧化与电子传递·························25 实验8 植物体内的转氨基作用·······················27 实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 （3学时） 目的要求 1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 . 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。 1．可逆沉淀反应 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。这种作用称为可逆沉淀反应。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质以及利用等电点的沉淀，提纯蛋白质时，常利用此类反应。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出，因此，变性蛋白质不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 ml/组 取5ml鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配置。 2. 蛋白质氯化钠溶液：3ml/组 取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。 3. 其余试剂： 硫酸铵粉末（10克/组），饱和硫酸铵溶液(150ml)，3%硝酸银（280ml），0.5%乙酸铅（200ml），浓硫酸（5ml/组），5%磺基水杨酸（100ml），0.1%硫酸铜（100ml），饱和硫酸铜溶液（400ml），0.1%乙酸（500ml），10%乙酸（500ml），饱和氯化钠溶液（25ml），10%氢氧化钠溶液（500ml）。 二、器材 试管（15支/组），过滤漏斗（1个），试管架1个/组，玻璃棒1支/组，沸水浴4台，量筒（总需要20ml×1,200ml×1），烧杯（总需要100ml×2，400×2），试剂瓶（12个/组，附胶头滴管10支/组），移液管（5ml×6/组，1ml×3/组），滤纸1盒，洗瓶1个/组，废液缸1个/组，药匙1个/组，移液管架1个/组 操作方法 一、蛋白质的可逆沉淀反应—蛋白质的盐析作用(分级盐析) 二、蛋白质的不可逆沉淀反应 1. 重金属沉淀蛋白质 2. 酸沉淀蛋白质 1） 2） 3. 加热沉淀蛋白质 取5支试管，编号，按下表加入有关试剂（单位/滴）。 蛋白质溶液 0.1%乙酸 10%乙酸 饱和氯化钠 10%氢氧化钠 蒸馏水 1 2 3 4 5 10 10 10 10 10 — 5 — — — — — 5 5 — — — — 2 — — — — — 2 7 2 2 — 5 将各管混匀，观察记录各管现象后，放入沸水浴中加热10min，比较各管的沉淀情况。 思 考 题 1. 名词解释：水化层；双电层；蛋白质变性；盐溶与盐析；蛋白质等电点沉淀。 2. 将实验结果写在实验报告中操作方法的对应位置上并就