CD40L转染小鼠结肠癌细胞致敏树突状细胞抗肿瘤作用的探究.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………5 研究论文CD40L转染小鼠结肠癌细胞致敏树突状细胞抗肿瘤作用的研 究 引言………………………………………………………………………．9 第一部分表达CD40L结肠癌细胞的生物学特性的研究 前言……………………………………………………………………．．11刖舌……………………………………………………………………．．1上 材料与方法……………………………………………………………．．12 结果……………………………………………………………………．．26 附图……………………………………………………………………．．28 附表……………………………………………………………………．．33 讨论……………………………………………………………………．．34 结论……………………………………………………………………．．36 参考文献………………………………………………………………．．36 第二部分表达CD40L基因的结肠癌细胞诱导树突状细胞成熟及 细胞因子分泌的抗肿瘤效应的研究 前言……………………………………………………………………．．38 日U舌……………………………………………………………………．．3芍 材料与方法……………………………………………………………．．39 结果……………………………………………………………………．．46 附图……………………………………………………………………．．48 附表……………………………………………………………………．．54 讨论……………………………………………………………………．．55 结论……………………………………………………………………．．57 参考文献………………………………………………………………．．57 综 述基因修饰的树突状细胞应用于肿瘤免疫治疗的研究进展……60 致 谢……………………………………………………………………．．70 个人简历……………………………………………………………………．．71 中文摘要 CD40L转染小鼠结肠癌细胞致敏树突状细胞抗 肿瘤作用的研究 摘 要 目的：采用小鼠结肠癌细胞为研究对象。研究转染CD40L基因的小 鼠结肠癌细胞抗肿瘤效应，以及表达CD40L基因的肿瘤细胞诱导骨髓起 源的树突状细胞(dendriticcells，DC)产生免疫抗肿瘤作用的情况，分析 CD40L基因及其瘤苗在结肠癌治疗中的效果及作用机制，探讨表达 疫苗在结肠癌的临床治疗研究提供理论依据。 方法： lCD40L真核表达载体的扩增、鉴定与大量制备 I酶切鉴定、PCR鉴定及 取试剂盒提取质粒，用限制性内切核酸酶EcoR 质粒测序分析鉴定。将鉴定符合实验条件的质粒进行大量制备。 2细胞培养和质粒转染及筛选稳定转染的细胞系采用脂质体转染法 抗药性克隆，并以相同的方法得到空载体转染细胞。 3细胞转染效率测定用流式细胞术检测各组细胞CD40L的表达。分 胞CD40LmRNA及蛋白的表达。 的增殖情况，并绘制细胞生长曲线。 检测各组细胞MMP．2 袭能力。 6小鼠骨髓源性DC的制备取BALB／c雌性小鼠的胫骨和股骨骨髓 RPMI．1640中培养7天。收集 细胞，在含GM．CSF、IL-4的10％FCS 非黏附的细胞并用CDllc+磁珠进行筛选，筛选后细胞用作DC。流式细 胞术检测DC细胞表面CDllc的表达。 中文摘要 7肿瘤细胞与DC共培养对DC功能的影响测定将各组细胞与DC 共培养24