高考生物二轮专题复习“知识落实篇”专题九-第一讲-基因工程和细胞工程课件.pptVIP

(2)基因表达载体的构建步骤。 3．基因导入受体细胞方法 生物种类 常用方法 受体细胞 转化过程 植物细胞 农杆菌转化法 体细胞 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 动物细胞 显微注射法 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 微生物细胞 Ca2＋处理法 原核细胞 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 4.目的基因的检测与鉴定 类型 分子 水平 检测 个体水平鉴定 步骤 第一步 第二步 第三步 包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等 检测内容 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 目的基因是否转录出mRNA 目的基因是否翻译出蛋白质 方法 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间杂交) 蛋白质分子杂交(抗原—抗体之间杂交) 结果显示 是否成功显示出杂交带 同上 同上 [特别提醒]　(1)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。 (2)基因工程四步曲中，只有第3步“将目的基因导入受体细胞”没有发生碱基互补配对，其他三步中都涉及碱基互补配对，具体过程如下： ①第1步中发生在反转录法合成目的基因过程中； ②第2步中发生在黏性末端相互连接配对过程中； ③第4步中目的基因的导入检测、转录检测发生碱基互补配对。 对位训练 1．(2012年福建卷)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。 请回答： (1)进行过程①时，需用__________酶切开载体以插入let-7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为________。 (2)进行过程②时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。 (3)研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞提取________进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中________(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。 解析：(1)过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便于目的基因的插入(限制性核酸内切酶，简称限制酶，写其他的不得分)；启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶结合和识别的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。(2)过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养。(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或 者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺组织细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”导入let-7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制。 答案： (1)限制性核酸内切酶(或限制)　启动子　(2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白 整合二 基因工程的应用成果 1．乳腺生物反应器与工程菌生产药物的比较 (1)概念。 ①乳腺生物反应器是指将外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达，利用动物的乳腺组织生产药物蛋白。 ②工程菌是指用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。 (2)两者的区别。 比较项目 基因结构 基因表达 受体细胞 乳腺生物反应器 动物基因的结构与人类基因的结构基本相同 合成的药物蛋白与天然蛋白质相同 动物的受精卵 工程菌 细菌或酵母菌等生物基因的结构与人类基因的结构有较大差异 细菌细胞内没有内质网、高尔基体等细胞器，产生的药物蛋白可能没有活性 微生物细胞 导入目的基因的方式 生产条件 药物提取 生产设备 显微注射法 不需严格灭菌，温度等外界条件对其影响不大 从动物乳汁中提取 畜牧业生产，加提取设备 感受态细胞法 需严格灭菌，严格控制工程菌所需的温度、pH、营养物质浓度等外界条件 从微生物细胞中提取 工业生产，设备精良 (续上表) 2.基因治疗的类型比较 比较项目 成果举例 过程 特点 相同点 体外基因治疗 用腺苷酸脱氨酶基因治疗复合型免疫缺陷症 从患者体内获得某种细胞→体外完成基因转移→筛选、细胞扩增→输入体内(实例中第一个)