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CLEC9A 对树突状细胞功能和特性的实验研究 中文摘要 CLEC9A 对树突状细胞功能和特性的实验研究 中文摘要 目的： 研究经脂质体转染 CLEC9A 基因，构建过表达 CLEC9A 的大鼠树突状细胞及 DC2.4 细胞，并检测树突状细胞功能和性质的变化。 方法： 提取4-8周龄SD雄性大鼠股骨骨髓细胞，通过红细胞裂解液筛除红细胞，获得骨 髓单个核细胞（bone marrow-mononuclear cells, BM-MNCs ），其中贴壁细胞经细胞因 子GM-CSF，IL-4和TNF- α诱导产生DCs，每日观察DCs形态变化；由苏大附二院神经 外科课题组惠赠的DC2.4传代铺板待转染；收集生长到第5天的DCs及传代DC2.4开始 转染不同浓度的质粒-脂质体复合物，通过荧光及Real-Time 、PCR检测CLEC9A转染 效率，寻找出最适的转染浓度；目的基因、空载体转染DC细胞及DC2.4细胞，流式细 胞仪检测不同转染组的转染效率，PCR与Western blot法检测CLEC9A在大鼠DC细胞及 DC2.4细胞中的表达情况，构建出过表达CLEC9A 的树突状细胞，即DC/CLEC9A细胞 和DC2.4/CLEC9A细胞；采用PCR与流式细胞技术检测在大鼠肿瘤抗原刺激下的各组 细胞表面分子CD80、CD83、CD86和MHC Ⅱ的表达情况，从而研究DC转染前后功能 和性质的变化。 结果： 通过不同浓度质粒-脂质体复合物转染大鼠骨髓 DC 及 DC2.4 细胞，发现质粒 CLCE9A 浓度为3ug，按脂质体：质粒=3ul ：1ug 的比例形成的质粒-脂质体复合体的 转染效率最好；转染后大鼠骨髓DC 和DC2.4 细胞表面的CLEC9A 分子表达量较未 转染细胞均明显提高，DC2.4 细胞的转染效率相比DC 细胞的转染效率，高出2 倍左 右；在大鼠肿瘤抗原的刺激下，DC/CLEC9A 细胞表面分子CD80、CD83、CD86 和 MHC Ⅱ表达量均较未转染前明显增加，但基本未检测到DC2.4/CLEC9A 细胞表面的 CD80、CD83、CD86 和MHC Ⅱ分子较未转染前有明显增加。 I 中文摘要 CLEC9A 对树突状细胞功能和特性的实验研究 结论： 1. 脂质体对贴壁生长的DC2.4细胞的转染效率明显高于半悬浮生长状态的DC细 胞； 2. 转染浓度为3ug：9ul的质粒-脂质体复合物转染树突状细胞的效率更高； 3. 贴壁生长的DC2.4细胞株虽然能传代，但缺乏正常DC细胞表面高表达的分子， 如CD80、CD83、CD86和MHC Ⅱ，虽然脂质体转染效率很高，但在肿瘤抗原刺 激后，表面分子的表达量并未有相应地明显增加，细胞株DC2.4有可能在传代 的过程中逐渐失去了DC细胞正常的活性和生理功能； 4. 大鼠骨髓DC细胞表面分子CLEC9A 的表达量增多可增强DC细胞的活性和功能， 有一定的临床应用前景。 关键词：树突状细胞；DC2.4 细胞；CLEC9A ；表面分子； 作 者：吴颖 指导老师：庄志祥 副教授 II The experimental research about CLEC9A on effects of features and functions of dendritic cells Abstract The experimental research about CLEC9A on effects of features and functions