一种用于防治水产动物细菌性疾病的绿色杀菌剂及其制备方法.docVIP

摘要 本发明公开一种水产生物制剂及其制备方法和应用。该生物抑制和杀菌剂是由黄伞和九州虫草黄伞九州虫草常见水产病原菌抑活性3块0.5 cm2大小的菌丝块接种于1000 ml的三角瓶中，放置在旋转摇床上，在26℃条件下150 rpm震荡培养d； 所述的液体发酵培养基马铃薯将发酵菌液，发酵液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩20倍取上清浓缩了20倍鳗弧菌溶藻弧菌迟缓爱德华式菌嗜水气单胞菌鳗弧菌溶藻弧菌迟缓爱德华式菌嗜水气单胞菌目前，用抗生素治疗水产动物的细菌性疾病所产生的严重药物残留及病原菌抗药性使水产类食品的安全问题日益突出，影响了人类健康和水产养殖业的可持续发展。虽然很多抗生素类渔药，如氯霉素、呋喃西林、环丙沙星等已被禁用，但是由于没有高效而廉价的替代品，抗生素仍然作为主要的抑菌药物被使用。伴随着抗生素的滥用，水产病原菌的耐药性呈增长趋势，并产生了多重耐药性菌株李甘强, 水产细菌耐药性的最新研究概况. 农业与技术，2014，84（7）：176。随着人们环保意识的加强和对食品安全要求的提高，从动植物中寻找和提取广谱、高效、低毒、天然的新型抑菌物质的研究已成为当前渔药研究的热点张传亮，李小飞，余为一．水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测．中国微生态学杂志，2007,19(2)：152-157。食药用真菌作为一种可食药用的大型真菌，具有较高的营养价值和药用价值，已被广泛应用于保健品行业。食药用真菌目前，已发现某些食(药)用菌的子实体、菌丝体或发酵液中的代谢产物具有抑菌活性张秋胜，徐丙莲，刘林德，刘浩，程显好，张玉香，10种真菌深层发酵液抑菌活性分析，中国酿造，20109：70-72通过对黄伞和九州虫草深层发酵液对水产致病菌的体外抑菌实验，真菌深层发酵液对水产养殖病原菌的抑制活性黄伞与九州虫草深层发酵液对四种病原菌嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌藻弧菌和鳗弧菌均具有较强的抑菌活性，且这种抑菌活性对发酵液的pH值和温度具有广适应性九州虫草深层发酵液对四种病原菌的抑菌活性强于黄伞深层发酵液两种真菌深层发酵液混合后对嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌的抑菌活性较单一发酵液的明显增强；两种发酵液混合对溶藻弧菌的抑菌活性较单一九州虫草发酵液的有所减弱，但仍强于单一黄伞发酵液3块0.5 cm2大小的菌丝块接种于1000 ml的三角瓶中，放置在旋转摇床上，在26℃条件下150 rpm震荡培养d。 所述的液体发酵培养基马铃薯在26℃条件下150 rpm震荡培养d后，可根据生产规模，按1%的接种量进行大型发酵培养，大型发酵培养参数按本领域的常规参数即可。 以上所述的方法，优选的，发酵完毕后，将发酵菌液，发酵液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩20倍取上清浓缩了20倍PDA固体培养基马铃薯 1、首次发现了黄伞深层发酵液和九州虫草深层发酵液对四种水产病原菌嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌藻弧菌和鳗弧菌均具有较强的抑活性真菌发酵液往往作为发酵工业的废液直接排放，污染水资源环境，因此，本可为大型食药用真菌发酵液“变费为宝”提供理论基础，也开拓了食用菌发酵液在水产病害防治中的应用。真菌深层发酵液抑菌活性具有pH值和温度的广适应性在pH值为3 9.0的范围内，黄伞和九州虫草发酵料的抑菌活性变化不大，表现出一定的稳定性，在水产养殖中，正常养殖水体的pH值为中性或弱碱性因此，黄伞和九州虫草发酵料的抑菌活性将不受养殖水体pH值变化的影响。和九州虫草深层发酵液嗜水气单胞菌沸水中 min，抑菌和杀菌活性不受影响。在发酵培养基中添加益植素，黄伞和九州虫草图1和九州虫草发酵液及发酵液混合的抑菌比较图 (Pholiota adiposa，CFCC6160）和九州虫草(Cordyceps kyusyuensis A. Kawam，CFCC89250）来自中国林业微生物保藏管理中心嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila，ATCC7966）、鳗弧菌Vibrio anguillarum，ATCC19019）、溶藻弧菌Vibrio alginolyticus，ATCC17749）、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda，ATCC15947）来自美国模式培养物集存库将接种于PDA培养基平板上，26℃培养经两次转接活化后接种钩刮取3块0.5 cm2大小的菌丝块接种于1000 ml的三角瓶中，放置在旋转摇床上，在26℃条件下150 rpm震荡培养d。 1.3 分别收集和浓缩每个锥形瓶中的发酵液。将发酵菌液，发酵液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩20倍取上清浓缩了20倍培养基马铃薯PDA固体培养基马铃薯将接种于PDA培养基平板上，26℃培养经两次转接活化后接种钩刮取3块0.5 cm2大小的菌丝块接种于/1000 ml的三角瓶中，放置在旋转摇床上，在26℃条件下150 rpm震荡培养d。 2.3 分别