牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析-广东农业科学.pdfVIP

广东农业科学 2016，43（12）：108-114 Guangdong Agricultural Sciences doi：10.16768/j.issn.1004-874X.2016.12.019 刘华，施婷婷，施志仪 . 牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析［J］. 广东农业科学，2016，43（12）：108-114. 牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析 刘  华，施婷婷，施志仪1 1 2 （1. 南宁富莱欣生物科技有限公司研发中心，广西 南宁 530003； 2. 上海海洋大学生物技术研究中心，上海 200090） 摘  要：根据 GenBank 中虹鳟 、大菱鲆 、斑马鱼及其他生物的精氨酸酶基因序列设计并合成一对引物， 并提取变态期牙鲆仔鱼总 RNA 作为模板进行 RT-PCR，得到一条 cDNA 片段。将产物连接到 T 载体中，转 化、扩增重组质粒。提取大肠杆菌中的重组质粒进行 DNA 测序。将 DNA 测序所得到的基因序列翻译成蛋 白序列和已知的大菱鲆 、鲤鱼 、虹鳟 、斑马鱼 的精氨酸酶基因序列进行同源性分析。结果显示，利用 RT- PCR 的方法扩增出一条 284 bp 的目的基因片段，比对结果发现，其与大菱鲆 、鲤鱼 、斑马鱼 以及虹鳟精 氨酸酶基因蛋白序列的同源性分别为 96％、85％、84％和 82％。对蛋白序列进行生物信息学分析发现， 整个蛋白序列中无信号肽，无糖基化位点，无跨膜结构域，但含有一个典型的 arginase 结构。在 N- 端第 38～44、57～64、71～76、89～94 区段有 β- 折叠中心；第 7～18、50～52、81～87 区段可能形成 α 螺旋区 域。Arg 蛋白 N 端第 37～45 和第 74～77 区段为优势抗原表位区域。 关键词：牙鲆；精氨酸酶；克隆；序列分析 中图分类号：S917 文献标识码：A 文章编号：1004-874X（2016）12-0108-07 Cloning and sequencing of gene fragments of Paralichthys olivaceus arginase 1 1 2 LIU Hua ，SHI Ting-ting ，SHI Zhi-yi （1. RD Center of Nanning Fresh-lif e Bio-technology Co. ，Ltd ，Nanning 530003 ，China ； 2. ， ， 200090 ， ） Research Center of Biotechnology Shanghai Fisheries University Shanghai China Abstract ：A pair of primers was designed and synthesized according to the conservative nucleotide sequence （GenBank）of ， ， ， ，e