Dickkopf-1通过Wnt通路对卵巢癌侵袭的作用.pdfVIP

弋趴￡／叭p月／秀名·害仁何干 ·中文论著摘要· 目的 卵巢癌是女性生殖道恶性肿瘤之一，其临床生物学行为特点是起病隐匿、发 展迅速，诊断时超过70％的患者已是晚期，是病死率最高的妇科恶性肿瘤。侵袭 和转移是卵巢癌的重要生物学特征之一，也是造成卵巢癌患者死亡的主要原因。近 年来信号转导通路相关因子在肿瘤细胞中的作用机制，是科学工作者的研究焦点。 目前研究发现Wnt通路与卵巢癌发生，发展过程密切相关。因此，探寻Wnt通路关 一种分泌型糖蛋白，早期研究发现DKK-1与多种恶性肿瘤关系密切，可以通过拮 传导途径，在抑制肿瘤细胞的侵袭转移过程中起着重要的作用。但近期研究发现 DKK—l在不同的恶性肿瘤中生物学作用并不一致，部分研究认为DKK-1可能具有 癌基因的特性，但其功能作用目前不清。本项目旨在研究DKK-1在卵巢癌中的表 达作用情况，比较其与卵巢癌临床病理参数及卵巢癌预后的关系，力争寻找新的 卵巢癌肿瘤标记物。同时深入研究DKK-1对卵巢癌细胞侵袭的影响及其作用机制， 探讨卵巢癌发生、发展过程中DKK—l能否通过WNT信号通路促进肿瘤细胞的侵袭 能力。 方法 1．应用real．timeRT-PCR检测56份卵巢癌、35份卵巢良性肿瘤和12份正常卵 巢组织中DKK．1基因的表达，比较DKK．1基因在不同病理程度的卵巢组织 中的表情情况。 2．应用免疫组化方法检测上述标本中DKK-1蛋白的辰达分布情况，并探讨其与 卵巢癌患者年龄、临床期别、细胞分化程度、组织学类型及淋巴结转移等临 床病理因素以及5年生存率的关系。在上述组钐{标本中，随机选取lO份卵巢 癌，5份卵巢良性肿瘤和5份正常卵巢组织，应用Wersternblot方法定量检测 DKK-1蛋白的表达情况。 3．通过应用RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞中DKK-1蛋白的表达以及外源性给予 模型。应用Transwell细胞外侵袭实验观察DKK-1蛋白表达缺失及高水平表达 前后卵巢癌细胞侵袭能力变化情况。细胞免疫荧光技术及扫描电镜技术观察 DKK-1蛋白对卵巢癌细胞骨架以及丝状伪足的影响。 4．构建Dl(1(一1基因沉默裸鼠模型，将正常卵巢癌细胞、DKK-1沉默后的卵巢癌细 胞接种到裸鼠体内，定期观察记录小鼠体重，瘤体的大小，进一步明确DKK-1 对卵巢癌侵袭的影响。 5．通过Werstemblot方法检测DKK一1蛋白表达缺失及高水平表达前后，9 -catenin蛋白，JNKl蛋白以及P—JNKl蛋白在胞浆及胞核中表达变化情况。 细胞系中，通过应用RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞中DKK-1蛋白的表达，通 受体Fzd3的结合情况。 结果 1、DKK．1 DKK．1 mRNA在卵巢良性肿瘤中的表达量是正常卵巢组织的1．1士0．4倍，但无 统计学差异(P=0．486)。 2、免疫组化结果表明DKK．1蛋白在J下常卵巢组织中的表达率为58．33％(7／12)， 在卵巢良性肿瘤组织中的表达率为65．71％(23／35)，在卵巢癌组织中的表达率 为89．29％(50／56)，DKK．1蛋白在卵巢癌组织中的表达明显高于卵巢良性组织 巢良性组织中的表达与正常卵巢组织比较无明显差异，(贮=0．211，P=O．646)。 2 II期)， 42．3l％；x (80％VS 2_8．443，P=O．004)；在低分化肿瘤中的强阳性 40％：X 表达率明显高于高、中分化肿瘤(75％VS 强阳性表达率与卵巢癌组织学类型和患者年龄以及淋巴转移无明显相关(P vs 达及表达阴性的卵巢癌患者(36．004-10．00570．00-a：2．191月．P0．0001)。 blot结果 Cl_1．114．5．766)，P--0．025)