绵羊血管内皮生长因子d基因克隆与表达分析.pdfVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０１６（０６上）：１－６，１１ 绵羊血管内皮生长因子 Ｄ基因 克隆与表达分析 １ １ １ ２ １ １ １ 张立春 ，马惠海 ，曹　阳 ，孙福亮 ，翟　博 ，张明新 ，金海国 （１．吉林省农业科学院畜牧分院，吉林 公主岭 １３６１００；２．延边大学农学院， 吉林 延吉 １３３００２） 中图分类号：Ｓ８２６；Ｑ７８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－７０３４（２０１６）０６－０００１－０７ 关键词：血管内皮生长因子Ｄ（ＶＥＧＦ－Ｄ）；新吉细毛羊；小尾寒羊；基因克隆；表达分析 摘　要：为了克隆小尾寒羊与新吉细毛羊血管内皮生长因子Ｄ（ＶＥＧＦ－Ｄ）基因，检测其多态性及组 织表达分布规律，探讨两个品种绵羊毛用性状差异是否与该基因存在必然联系，试验提取小尾寒羊与 新吉细毛羊皮肤及不同组织总ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆ＶＥＧＦ－Ｄ基因并进行生物信息学分 析，定量ＰＣＲ方法分析两个品种间该基因的表达差异。结果表明：成功克隆出小尾寒羊与新吉细毛 羊ＶＥＧＦ－Ｄ基因，该基因全长１４８７ｂｐ，含有完整的开放阅读框（ＯＲＦ），长度为１０６５ｂｐ，编码３５４个 氨基酸。绵羊ＶＥＧＦ－Ｄ基因无论在核苷酸还是氨基酸水平上与亲缘关系更近的牛具有较高同源 性。小尾寒羊及新吉细毛羊品种间ＶＥＧＦ－Ｄ基因存在较多的多态位点，且相应突变位点均引起氨 基酸的改变，提示该基因在品种间存在较大的选择压力，上述突变位点主要位于ＰＤＧＦ结构域两侧， 提示其可能通过影响ＶＥＧＦ－Ｄ蛋白的水解过程来调控其功能。绵羊ＶＥＧＦ－Ｄ基因为各组织广泛 表达基因，但其主要在肺脏与脾脏中高表达。不同季节绵羊皮肤组织ＶＥＧＦ－Ｄ基因表达模式不同， 主要表现为寒冷季节高表达，而气温升高表达量逐渐降低。说明小尾寒羊与新吉细毛羊两个品种中 ＶＥＧＦ－Ｄ基因存在较高的多态性，不同组织器官与不同季节皮肤组织表达分布相类似。 　　毛囊作为皮肤主要附属物，构成及生理过程极为 通过特异性抗体阻断 ＶＥＧＦ则可完全抑制毛发生 复杂，经历着生长期、退行期和休止期周期性循环过 长［９－１１］。在硬皮病小鼠模型中，通过转基因方法特 程，对应着毛发生长、脱落与再生的生理阶段，是动物 异性地在皮肤组织中表达ＶＥＧＦ１６５基因，可使得小 体唯一终生经历周期性转化的器官［１］。毛囊周期性 鼠皮肤真皮组织厚度增加，新生血管增加，皮肤毛发 生长与自我更新是一个极为复杂的生理过程，众多细 ［１２］ 生长恢复 。 ［２］ 胞因子参与其生理过程的调节 。作为血管增殖关 ＶＥＧＦ是一类分子质量为３４～４５ｋｕ的分泌性糖 键性细胞因子，血管内皮生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅ 蛋白。现已发现的人 ＶＥＧＦ家族成员包括 ＶＥＧＦ－ ｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）在毛囊周期性生长中发挥着 Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ和胎盘 重要的作用［３－５］。研究结果表明，人斑秃头皮组织中 生长因子（ｐｌａｃｅｎｔａｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＬＧＦ），其核心的功 ［６］ ＶＥＧＦ表达量显著低于正常头皮组织 ，能显著促进 能是促进血管内皮细胞增殖、增强血管通透性及改变 毛发生长的各类生发剂均能促进皮肤 ＶＥＧＦ的分 细胞外基质、诱导血管生成，但各家族成员间分子功 泌［７－８］。体外培养的皮肤毛囊组织，在培养液中添加 ［１３］