埃及2012年肉鸡及蛋鸡养殖场传染性支气管炎病毒分离株分子流行病.pdfVIP

总第14期/2014年4月 埃及2012 年肉鸡及蛋鸡养殖场传染性支气管炎病毒分离株 分子流行病学特性 Karim Selim a,*, Abdel Satar Arafa a, Hussein A. Hussein b, Ahmed A. El-Sanousi 摘要：鸡传染性支气管炎病毒（ IBV ）的一个关键问题就是新突变株的频繁出现。在本研究中，自2012年1月至8月期 间，我们从埃及的19个省的肉鸡和蛋鸡场收集了205份气管拭子和组织样品。鸡只表现为呼吸道症状并伴有死亡。在检 测的样本中，通过实时定量RT -PCR检测发现，其中130个疑似感染农场为IBV阳性（约64 ％ ）。我们从中选择了13份IBV 阳性样品进行进一步的分离和特征鉴定。通过在无特定病原体（ SPF）鸡胚进行三次连续盲传，我们对病毒进行了分离， 随后通过RT -PCR对S1蛋白 （SP1）的高变区进行了扩增并测序，以此来研究不同病毒分离株之间的遗传多样性。系统发 育分析显示，所获得的13株序列与来自中东和全世界的其他毒株相比，13株中的11株与以色列突变株 （IS/885和 IS/1494/06 ）有着密切的关系，其核苷酸同源性分别为89.9 ％和82.3 ％。其余两株病毒分别与CR/88121和4/91有着 密切的关系，同源性分别为95 ％和96 ％ 。这项研究表明2012年在埃及IBV有两个突变群流行，第I群类似于以色列突 变株IS/885，但存在区别，第II群与4/91和CR / 88121疫苗株有关。由于这些毒株分散于全国各地，两群之间没有地域 联系。这些发现证明，有必要对IBV疫苗接种程序和控制措施进行修改。 1 引言 传染性支气管炎（ IB ）是鸡的一种急性、高度传染性呼吸道疾病。本病的特征是呼吸道症状，雏鸡常发生严重的呼吸 窘迫，而且会导致蛋鸡产蛋量降低[ 1 ] 。直到最近，鸡被认为是IBV的唯一自然宿主，并且感染病毒后致病。目前认为雉 和其他禽类是IBV的第二自然宿主 [ 2 ] 。该疾病通过空气途径、鸡只之间的直接接触以及通过机械器具间接传播 [3]。 传染性支气管炎病毒属于Nidovirales病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属。IBV和火鸡和野鸡等其他禽类冠状病毒被分为 冠状病毒第3群，哺乳动物冠状病毒则构成了冠状病毒1、2和4群。第4群为最近发现的严重急性呼吸道综合征（SARS ）冠状 病毒[ 4 ] 。 IBV为单链正股RNA囊膜病毒，含有一个约27.6 kb大小的不分节段的基因组。病毒粒子有四个结构蛋白：核衣 壳蛋白（N ）、膜糖蛋白（M ）、小包膜蛋白（E）和糖基化纤突蛋白（ SP ） [ 5 ] 。 由于RNA病毒存在频繁的点突变和重组事件，目前已报道了多种IBV的血清型。出于这个原因，对病毒分离株的特性进行 鉴定是非常重要的[6]。纤突 （SP）蛋白是IBV的主要结构蛋白之一，并被裂解成两个较小的蛋白质，即SP1和SP2， SP1基因 含有两个高变区，且与中和抗体及血清型特异性抗体的诱导有关 [7]。 已在埃及的多个家禽养殖场发现了不同血清型以及与Massachusetts、D3128， D274 ， D- 08880和4/91基因型相关IBV 突变株的存在 [ 4,8-10 ] 。因此，IBV野毒株基因分型对于筛选新的突变株以及评价疫苗接种计划非常重要。从表现出呼 吸症状和肾脏病变的肉鸡中分离的禽IBV毒株与Beni-Suef/01毒株和IS/885毒株的氨基酸序列同源性分别为89 ％和84％，核 苷酸序列同源性为88 ％[11]。 本研究的目的是对埃及养鸡场中传染性支气管炎病毒的情况进行调查，对分离到的现场样品进行基因型区分，来探索埃 及养鸡场中出现的新的变异株情况。 2. 材料与方法 2.1 . 采样 在这项研究中, 为了调查IBV的患病率，我们在2012年1月到8月期间对埃及19个省的养鸡场进行了监测，对出现呼吸道 症状和死亡的205 个养殖场进行了样品采集，其中肉鸡养殖场179个，蛋鸡场26个。每个临床病例收集10个气管拭子，并从 死禽收集组织 （气管，肾脏和肺）。 从样品中选取13个代表来自不同省份的阳性病例的病毒分离株 （19个省份中的13个为阳性， 其中3个省份为PCR阳性， 但未分离出病毒，3个省份PCR和病毒分离为阴性）。如表1所示。 表1 IBV分离株信息 No. 毒株名称