miR-22对卵巢癌浸润转移的抑制作用和调控机制研究.pdfVIP

目 录 中文摘要 ……，… … 1 英 文摘 要 … … ，2 前 言 … … ，… …3 第 一 部 分 : R eal一tim e R T-P C R 验证 m iR- 22 在 两 对 不 同侵袭 能力 的卵巢 癌细 胞 株 SK O V- 3/SK O V- 3ip 细 胞 、H O 一89 10舰 O 一89 loPM 细 胞 中的差 异 … …4 材 料 与方 法 … …4 结 果 … … ，… …7 结 论 ……8 第 二部 分 : m iR 一22 在细 胞 水平 的功 能研 究 ……8 材 料 与方 法 … … ，… …8 结 果 … …n 结 论 … …16 第三 部 分 : m iR 一22 下游 靶基 因筛选 … …17 材 料 与方 法 … … ，… …17 结 果 … … ，… …22 结 论 … … ，… …28 讨 论 … …29 结 论 … …，二，… …32 参 考 文 献 ，… … ，… … ，… …33 综 述 … …36 在 读 期 间发表 论著 …… ，… …45 致 谢 … …65 中文摘要 目的 探 讨 m iR 一22 对 卵巢 癌 浸 润转 移 的抑 制作用 ，及 其 卵巢癌 细 胞生 长 、凋亡 水平 的影 响 ，初 步筛选 出 m iR 一22 发挥 作用 的潜 在靶基 因，为调控研 究打 下基础 。 方 法 ( l) 用 R eal一tim e R l’-PC R 验 证 m i凡 22 在 两 对 不 同 侵 袭 能 力 的 SK O V- 3/SK O V- 3ip 细 胞 、H O 一89 10/H O 一89 1opM 细 胞 中的表 达 差 异 ， 同时选 取 SK O V-3/SK O V- 3ip 细 胞用 于 以下实验 ; (2 ) 在相对低表达 m iR 一22 的 SK o V- 3ip 细 胞 中，用 m iR 一22 Precurso :上 调其 内源性 m iR 一22 的表达 水平 ，观察 卵巢癌 细 胞 侵袭 能力及细胞生长 、凋亡水平 的改变 : 在相对 高表达 m iR 一22 的 SK O V-3 细 胞 中，用 m iR 一22 InhL ibito:抑制 内源性 m iR 一22 的表达 水平 ，观察 卵巢癌细 胞侵袭 能力及 细 胞生 长 、凋 亡 水 平 的改变 ; (3) 生 物信 息学数据 库 (TA R G E T SC A N : h ttP ://www. targetsean .org 、 M IR A N D A : http ://www. m icrorn 和 p IC TA R : httP:刀~ p·ictar.m dc一bellin.de ) 预测 m iR一22 下游 与卵巢癌 浸润 转 移转移 相 关 的 靶 基 因 ; 选取其 中一个 靶基 因 Tiam l，用双 荧光素酶报 告基 因实验 、We stern Blot 及 R eal一tim e R l’-P C R 共 同验 证 m iR 一22 对 T iam l 的调控 作 用 。 结果 (l) R eal一tim e R l’-p C R 验证 发现 ，m iR 一22 在 高侵袭 力 的卵 巢癌 SK O V- 3ip 细 胞 和 H O 一89 10P M 细 胞 中均 呈 相 对 低 表 达 ，其 差 异 方 向与 我们 前 期 芯 片 结 果 一 致 ; (2) 在 SK O V- 3ip 细 胞 中，过表达 m iR 一22 则 能显著抑 制 其浸 润 和迁 移 能力 ; 在 SK O V- 3 细 胞 中， 降低 m iR 一22 表达 的能显著 促进 卵巢癌 细胞 的浸 润和迁 移 能 力 ; 但 改变 m iR一22 表达 对 卵巢 癌 细胞 的生长及 凋亡水平 无 明显影 响 ; (3) 生物 信 息学数据库 分析 发现 ，m iR 一22 下游 有 多个 与浸 润转 移 相 关 的靶 基 因