miR-27a及e-cadherin在胃癌腹膜高转移细胞系GC9811-P中表达分析的研究.pdfVIP

摘要 摘要 背景： 胃癌在全球发病率较高，是严重危害人类健康的恶性肿瘤。晚期胃癌患者 约一半以上出现腹膜转移，临床治疗效果差。microRNA是由20多个核苷酸组 成的非编码小RNA分子，与靶mRNA的3’端非编码区结合，降解或抑制靶mRNA 见的原因。有文献证实胃癌腹膜转移组织E．cadherin表达量比胃癌组织更低。 腹膜转移反义治疗靶点的可能性，对以后相关研究提供实验依据。 目的： l、从人胃腺癌细胞SGC7901、人胃低分化腺癌细胞MKN．28、胃癌腹膜高 转移性细胞GC9811-P等三种胃癌细胞中筛选出miR．27a过表达的细胞株。 后能否影响GC9811-P细胞增殖凋亡能力。 方法： MKN．28、GC9811-P的E．cadherin mRNA和蛋白、E．cadherin基因启动子区域甲 基化、miR．27a的表达；比较它们在三种胃癌细胞系中表达的差异。 2、实验分组：空白对照组(只加入培养基)、阴性对照组(转染100nmol／L miR27a． miRNA-angagomirnegativecontrol-FAM)、转染组：(转染100nmol／L antagomir-FAM)； 3、 1-P细胞，24h后荧光显微镜观察转染效 运用antagomir瞬时转染GC981 摘要 测E．cadherin 达量，比较各组间它们的表达差异。 4、利用MTT法评价各处理组GC9811-P细胞的增殖情况；通过流式细胞仪 观察各处理组GC9811-P细胞凋亡情况。 结果： 1、在三种胃癌细胞中，实时定量PCR结果显示GC9811-P细胞的miR．27a E．cadherin 的E．cadherin启动子区域甲基化表达水平最高(尸O．05)。 1-P的转染效率可达到 2、antagomir瞬时转染胃癌腹膜高转移细胞GC981 60％。转染组和空白对照组及阴性对照组比较，miR．27a表达明显降低俨O．05)， E．cadherin 甲基化得到逆转俨O．05)。 3、MTT法检测到转染组的GC9811-P细胞增殖速度，明显低于空白对照组、 阴性对照组(尸0．05)；转染组的CPIR(细胞增殖抑制率)明显大于阴性对照 组俨0．05)，且在转染36h后最大。 4、流式细胞仪结果显示转染组的GC9811-P细胞系凋亡细胞率明显高于其 它两组(P0．05)。 结论： 高，E．cadherin表达量最低，E．cadherin基因启动子区域甲基化状态最明显； 能逆转E．cadherin基因启动 2、下调胃癌GC9811-P细胞的miR．27a表达， 区域甲基化过程导致E．cadherin表达下调。 3、下调胃癌GC9811-P细胞的miR．27a表达，其增殖能力减弱，促其凋亡； miR．27a可能作为胃癌腹膜转移反义治疗靶点。 关键词： E．cadherin甲基化；胃癌腹膜转移 miR．27a；E．cadherim Abstract ABSTRACT Baekground： thecommon whichis tothe Gastriccancer(GC)is malignantendangerhealthy ofthe intheworld．Itis that metastasisinthehalfof people usuallyperitoneal hap