miR-302e在原发性胆汁性肝硬化固有免疫中的影响.pdfVIP

miR．302e在原发性胆汁性肝硬化固有免疫中的作用 摘要 性进行性胆汁淤积性肝脏疾病。其病理改变主要以肝内细小胆管的慢性非化脓性 破坏、汇管区炎症、慢性胆汁淤积、肝纤维化为特征，最终发展为肝硬化和肝衰 竭。多见于中年女性，男女比例约为l：9。PBC是一种典型的自身免疫性疾病， 其细胞免疫及体液免疫均发生异常反应。抗原特异性T细胞与自身抗原、病原 体之间发生了交叉反应使T细胞打破自身免疫耐受，激活的CD4及CD8T淋巴 细胞持续伤害胆小管，肝细胞和胆管上皮细胞，使其对激活的T淋巴细胞敏感 性增强，加重了免疫介导的细胞损伤。PBC患者主要的诊断指标是抗线粒体抗 体阳性。PBC患者目前无特效治疗，主要就是针对症状的支持治疗，熊去氧胆 酸是PBC的主要治疗药物。但该药只对部分患者有效，且只能延迟疾病进展。 最终患者仍需选择肝移植治疗，但目前肝移植在我国开展仍不广泛，许多患者都 得不到有效治疗，因此丌发新的治疗方案显得尤为重要。 固有免疫系统是抵抗病原体感染的第一道防线，单核细胞则是固有免疫系统 1 的重要力量，其表面存在可识别微生物相关分子模式(PAMP)的受体(PRR)。Tol 样受体就是PRR的一种类型。胆管内皮细胞就是通过PRR来识别PAMP。有文献 报道，固有免疫异常是PBC的重要发病特征，而PBC患者单核细胞功能亢进也是 众所周知的。说明固有免疫可能参与PBC的发病，但具体机制仍需深入研究。 可以直接抑制其翻译或者将其降解。研究表明，在机体的发育、肿瘤的产生、细 胞的凋亡等众多生理或者病理过程中，microRNA都发挥着极为重要的调控作用。 近年来，microRNA的免疫调控功能日渐引起了国内外学者的关注，基础免疫学 的研究发现：microRNA是调控免疫细胞的发育、分化以及免疫应答过程的重要 因子：临床免疫学研究也发现，多种自身免疫性疾病的发病机制与microRNA密 切相关。 基于以上情况，本课题拟通过测定PBC患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细 第二军医大学硕士学位论丈 提供新的靶点。 第一部分PBC患者各细胞亚群内miR-302e的相对表达水平 参与了PBC的发病机制。本部分根据前期miRNA芯片表达谱筛选结果，选择了降 T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞，使用荧光定量PCR方法检测三系细胞中 胞和单核细胞内miR一302e的表达均较健康个体显著降低，其中尤以单核细胞内 述细胞亚群中miR．302a的表达差异，结果发现：PBC患者B细胞、T细胞和单 核细胞内miR．302a的表达与健康对照个体之间的差异并不显著(P值均大于 O．05)。 本部分研究说明PBC患者PBMC中miR一302e表达量较健康对照明显降低， 并在单核细胞中表达最为明显。说明单核细胞内miR一302e表达下调在是PBC发 病的重要特征。 第二部分miR一302e负向调节LPS诱导THP-1细胞释放炎症因子的能力 在本部分研究中，我们通过改变特定免疫细胞内miRNA．302e的表达来分析 mimics、inhibitor、 其对细胞功能的调节作用。我们选用THP．1细胞，将miR．302e LPS刺激THP．1细胞可以 度发生了显著的变化(P值均小于0．01)。以100ng／ml mimics和miR．302e 显著诱导IL．6和TNF．Q的产生，而miR．302e inhibitor则分 别可以显著抑制和促进炎症因子IL．6和TNF．1：1的产生(P值均小于0．01)。 miR．302e在原发性胆汁性肝硬化固有免疫中的作用 本部分研究说明miR一302e可以负向调节THP．1细胞经LPS刺激后释放炎症 因子的能力。提示miR．302e可以负向调节固有免疫应答的因素，可能是PBC发 病机制中的重要因子，具有潜在的治疗价值。 第三部分PBC患者单核细胞对LPS刺激呈现高反应性