caxmt和tcs1突变体基因串联共表达及体外酶活检测-广西植物.pdfVIP

ｈｔｔｐ:/ / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ － 　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ｄｅｃ. ２０１６ꎬ３６(１２):１５０５ １５１０ － ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ ＤＯＩ:１０.１１９３１/ ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１５１０００３ － 武鑫ꎬ李萌萌ꎬ邓骋ꎬ等. ＣａＸＭＴ和ＴＣＳ１突变体基因串联共表达及体外酶活检测分析 [Ｊ]. 广西植物ꎬ２０１６ꎬ３６(１２):１５０５ １５１０ ＷＵ ＸꎬＬＩＭＭꎬＤＥＮＧＣꎬｅｔａｌ.Ｔａｎｄｅｍｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ＣａＸＭＴａｎｄｍｕｔａｎｔｓｏｆ ＴＣＳ１ａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏ [Ｊ].Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０１６ꎬ３６(１２): － １５０５ １５１０ ＣａＸＭＴ和ＴＣＳ１突变体基因串联共表达及体外酶活检测分析 武　 鑫ꎬ李萌萌ꎬ邓　 骋ꎬ邓威威ꎬ张正竹∗ ( 安徽农业大学 茶树生物学与资源利用国家重点实验室ꎬ合肥 ２３００３６ ) 摘　 要:咖啡碱和可可碱是茶叶生物碱的主要组分ꎬ且咖啡碱是茶叶重要的滋味物质ꎬ随着咖啡碱在食品和 药物领域的应用愈发广泛ꎬ咖啡碱的生物合成成为新的研究热点ꎮ 目前市场上的咖啡碱主要靠化学合成ꎬ为 了探索其生物合成途径ꎬ该研究将咖啡黄嘌呤核苷甲基转移酶(ｃｏｆｆｅｅ ｘａｎｔｈｏｓｉｎｅ ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅꎬＣａＸＭＴ)基 因和茶树咖啡碱合成酶(ｔｅａ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅꎬＴＣＳ１)基因的４个突变体分别串联至同一大肠杆菌表达载体 ｐＭＡＬ￣ｃ５Ｘꎬ诱导融合蛋白共表达ꎬ并进行ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ凝胶电泳分析ꎮ 结果表明:目的蛋白成功表达后ꎬ应用超 声破碎法制备含有目的蛋白的粗酶液ꎬ添加底物黄嘌呤核苷(ｘａｎｔｈｏｓｉｎｅꎬＸＲ)和甲基供体Ｓ￣腺苷甲硫氨酸(Ｓ￣ ａｄｅｎｏｓｙｌ￣Ｌ￣ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅꎬＳＡＭ)进行体外酶促反应ꎬ将反应产物进行高效液相色谱检测ꎮ 检测结果显示ꎬｐＭＡＬ￣ ＣａＸＭＴ￣ＴＭ２/ ３/ ４ 的体外酶促反应产物仅有可可碱生成ꎬ均未见咖啡碱生成ꎮ 该研究结果为构建生物合成咖 啡碱和可可碱的串联共表达载体奠定了基础ꎬ也为进一步研究生物合成咖啡碱和可可碱提供了新思路ꎮ 关键词:咖啡碱ꎬ串联共表达ꎬ体外活性 中图分类号:Ｑ５７１.１　 　 文献标识码:Ａ　 　 文章编号:１０００￣３１４２(２０１６)１２￣１５０５￣０６ Ｔａｎｄｅｍ ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣａＸＭＴ ａｎｄ ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ ＴＣＳ１ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＷＵＸｉｎꎬＬＩ Ｍｅｎｇ￣ＭｅｎｇꎬＤＥＮＧ ＣｈｅｎｇꎬＤＥＮＧＷｅｉ￣ＷｅｉꎬＺＨＡＮＧＺｈｅｎｇ￣Ｚｈｕ∗ (ＳｔａｔｅＫｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＴｅａＰｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎꎬＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨｅｆｅｉ２３００３６ꎬＣｈｉｎａ ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｃａｆｆｅｉｎｅ ａｎｄｔｈｅｏｂｒｏｍｉｎｅａｓｔｈｅｍａｊｏｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎｔｅａꎬｗｈｉｌｅｃａｆｆｅｉｎｅｉｓｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｔａｓｔｅｃｏｍ￣ ｐｏｕｎｄ.Ａｓｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｆ