MMP-9在EAE大鼠脊髓中的动态变化和普罗布考的干预作用.pdfVIP

中文摘要 MMP．9在EAE大鼠脊髓中的动态变化及普罗布考的干预作用 摘 要 目的：多发性硬化(multiple 症性脱髓鞘疾病，它的典型病理特征是炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴索变 性以及胶质细胞增生等。目前许多研究表明多发性硬化早期即存在血脑屏 障破坏，并推测其可能是多发性硬化发病的关键环节之一。实验性自身免 autoimmune 疫性脑脊髓炎(experimental 是MS的理想模型。其临床表现及病理改变与多发性硬化极为相似，为研 究MS免疫病理学机制及其实验治疗的最佳动物模型。 基质金属蛋白酶．9(Matrix 子依赖的蛋白酶，具有破坏血脑屏障，降解细胞外基质、髓鞘碱性蛋白的 作用，可以导致血管内皮细胞通透性增高，进而导致T淋巴细胞等炎症细 胞穿透血管基底膜进入中枢神经系统。MS血脑屏障的破坏、炎性细胞浸 润、髓鞘降解以及轴索的损伤等主要病理过程均与MMPs活性异常增高 有关，推测MMPs参与了MS的发病，但其具体机制尚不清楚。 Thl7细胞产生的一种强力致炎因子，与MS关系密切。 研究发现氧化应激在MS发病过程中起重要的作用，普罗布考是一种 降脂药物，但同时又具有强力的抗炎、抗氧化、清除自由基等作用，可通 过抗炎、减轻氧化应激反应、清除自由基等作用而减轻细胞的损伤。近年 来研究发现普罗布考可用于多种疾病的治疗，但是普罗布考用于多发性硬 化的研究很少，普罗布考能否通过它的抗炎、抗氧化、清除自由基等作用， 少。本研究通过普罗布考对EAE大鼠的干预来动态观察血脑屏障损伤和 血清炎症相关指标的变化，了解其是否对EAE有保护作用，从而为临床 治疗MS提供新的思路和实验依据，并且可直接应用于临床。通过对相关 指标的测定、分析，进一步了解MS的发病机制 方法： 中文摘要 1实验分组及干预措施 组，每组30只。对照组，用生理盐水加CFA注射动物。EAE组，以小 剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA免疫动物，建立EAE模型。普 罗布考．EAE组，以小剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA免疫动物， 处死。泼尼松+EAE组，以小剂量豚鼠全脊髓匀浆及含有卡介苗的CFA 免疫动物，建立EAE模型，免疫当天开始给予泼尼松(5mg／kg·d)灌胃， 亚组。 2动物模型的建立 豚鼠麻醉，冰上取脊髓全长，仔细去脊髓包膜并称重，加入10倍量 冰盐水，制成豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)，再加入等体积含6mg／mL卡介苗的 完全福氏佐剂(CFA)，冰上抽打制成油包水乳剂，为完全免疫抗原。按O．5 ml／只分别于大鼠四肢足垫及背部皮下注射抗原匀浆，建立EAE动物模型。 3临床评分 免疫后，观察动物精神反应状态、体重及活动等情况变化，并进行神 经功能评分。评分采用国际通用的Kono评分标准。 4检测指标 取腰膨大组织制做石蜡包块，行HE染色，用免疫组织化学法测定脊 髓腰膨大中MMP．9的表达。ELISA试剂盒检测血清IL．17含量。 结果： l发病情况：(Fi91)(Table2) 大鼠在抗原免疫诱导后逐渐出现精神萎靡，食欲不振，体重减轻，皮 毛不光滑等情况，并逐渐出现尾部无力、后肢无力、前肢无力甚至大小便 失禁等临床症状，大鼠发病临床表现呈动态性变化，普罗布考．EAE组、 醋酸泼尼松．EAE组大鼠发病时间，病情高峰期均推迟，症状较EAE组轻。 2神经功能评分：(Table1) 普罗布考．EAE组大鼠免疫后第14天神经功能评分低于EAE组，具 有统计学意义(PO．05)。 中文摘要 醋酸泼尼松一EAE组大鼠免疫后第14天神经功能评分低于EAE组， 具有统计学意义(PO．05)。 普罗布考．EAE组、醋酸泼尼松．EAE组免疫后第14天神经功能评分 差异无统计学意义(PO．05)。 3组织病理学改变：(Fi92．5) 的炎性细胞浸润，尤以14天组大鼠脊髓内炎性细胞浸润的程度最为显著， 血管周围出现密集的袖套样炎性细胞浸润。普罗布考．EAE组、醋酸泼尼 松．EAE组不同时间大鼠脊髓病理改变有不同程度的减轻。 4免疫组化结果：(Fi96—10)(Table3) 4．1EAE组和对照组两组比较 EAE组3天组、7天组、1O天组、14天组、2l天大鼠脊髓中MMP．9